Аутоімунні гемолітичні анемії. Проба Кумбс. Проби кумбса позитивна у новонародженого

На поверхні еритроцитів є велика кількість антигенів. Залежно від виду цих антигенів виділяють групи крові, найбільш вивчені групи - АВО, Rh, Kell, Duffy та багато інших.

Середня цінау вашому регіоні: 2645 від 2645 … до 2645

1 лабораторій роблять цей аналіз у вашому регіоні

Опис дослідження

Підготовка до дослідження:Кров беруть із вени, а потім одержують сироватку (плазма крові без фібриногену) шляхом природного згортання або шляхом осадження фібриногену. Досліджуваний матеріал:Взяття крові

На поверхні еритроцитів є велика кількість антигенів. Залежно від виду цих антигенів виділяють групи крові, найбільш вивчені групи - АВО, Rh, Kell, Duffy та багато інших систем. У нормі в крові існують антитіла до антигенів іншої групи, але при переливанні крові, вагітності, аутоімунних захворюваннях та ін. виявляються антитіла до своїх антигенів. Неповні антитіла до еритроцитів

Метод

Непряма реакція Кумбса ґрунтується на виявленні аглютинації (злипання) еритроцитів, у яких на поверхні є неповні антитіла, що з'являється при додаванні антиглобулінової сироватки.

На першому етапі одну пробірку вносять донорські еритроцити (O(I) група, Rh+) ​​і досліджувану сироватку. Якщо неповні антитіла до еритроцитів присутні в сироватці, що досліджується, то вони фіксуються на поверхні донорських еритроцитів.

На другому етапі на скло наносять донорські еритроцити з антитілами (якщо вони були) та стандартну антиглобулінову сироватку з антитілами до людських імуноглобулінів. Якщо на першому етапі антитіла до еритроцитів зафіксувалися на поверхні еритроцитів, при додаванні стандартної сироватки еритроцити склеюються через взаємодію антитіл.

Референсні значення – норма
(Реакція Кумбса непряма (антиглобуліновий тест, виявлення неповних антиеритроцитарних антитіл), кров)

Інформація, що стосується референсних значень показників, а також сам склад показників, що входять до аналізу, може дещо відрізнятися залежно від лабораторії!

Норма:

У нормі антитіл до власних еритроцитів повинно бути, при постановці реакції Кумбса агрегації еритроцитів немає.

Показання

Дослідження гуморального специфічного імунітетупри підозрі на аутоімунні реакції в організмі, резус-конфлікт між матір'ю та плодом, визначення сумісності крові донора та реципієнта

Підвищення значень (позитивний результат)

Антитіла до еритроцитів виявляють при:

1. Аутоімунних гемолітичних анеміях

2. Гемолітична хвороба новонароджених

3. Системні захворювання сполучної тканини

4. Хронічному активному гепатиті та ін.

Тест Кумбса

Тест Кумбса– антиглобулінова проба, спрямована на виявлення у резус-негативній крові неповних антиеритроцитарних антитіл до резус-фактора – специфічного білка, що знаходиться на поверхні еритроцитів резус-позитивної крові. Існує два види цього тесту: прямий – виявлення антитіл на поверхні еритроцитів, непрямий – виявлення антитіл у сироватці крові. Пряма проба здійснюється при діагностиці та моніторингу лікування захворювань крові: гемолітичної анемії, гемолітичної хворобиновонароджених та інших. Непряма проба виконується для оцінки сумісності крові донора та реципієнта при переливанні, а також для визначення наявності та ризику резус-конфлікту при плануванні та веденні вагітності. Матеріалом для тесту Кумбса є венозна кров, дослідження проводиться методами з урахуванням реакції аглютинації. У нормі обидві проби дають негативний результат. Аналіз виконується протягом дня.

Тест Кумбса – клінічне дослідженнярезус-негативної крові, спрямоване виявлення антитіл до резус-фактору. Проба використовується для виявлення ризику розвитку резус-конфлікту та гемолітичних реакцій. У кожної людини поверхня еритроцитів містить певний набір антигенів або аглютиногенів – сполук різної природи, за наявністю чи відсутністю яких судять про групу крові та резус-фактор. Існує безліч видів антигенів, медичної практикинайбільше практичне значення мають аглютиногени A та B, що визначають групу крові, та аглютиноген D – резус-фактор. При позитивному резус-факторі зовнішньої мембрані еритроцитів визначаються антигени D, при негативному – немає.

Тест Кумбса, який також називають антиглобуліновою пробою, спрямований на виявлення в крові неповних антиеритроцитарних антитіл до системи резус-фактора. Антитіла до резус-фактора – специфічні імуноглобуліни, які виробляються у резус-негативній крові при попаданні до неї еритроцитів з аглютиногенами D. Це може статися при змішуванні крові плода та вагітної, при гемотрансфузіях, проведених без попереднього типування крові. Тест Кумбса існує у двох варіантах – прямий та непрямий. При виконанні прямого тесту Кумбса виявляються антитіла, що закріплені на поверхні еритроцитів. Дослідження використовується встановлення причини гемолітичної реакції. Непрямий тест Кумбса спрямований на виявлення антиеритроцитарних антитіл у плазмі. Він необхідний визначення сумісності крові донора і реципієнта чи матері та плода, дозволяє попередити розвиток резус-конфлікту і наступного гемолізу еритроцитів.

Кров для обох варіантів тесту Кумбса береться з вени. Аналіз виконується методом аглютинації з використанням антиглобулінової сироватки. Результати дослідження знаходять застосування в гематології при виявленні причин гемолітичних реакцій, хірургії та реаніматології при проведенні гемотрансфузій, в акушерстві та гінекології при моніторингу вагітностей у жінок з резус-негативною кров'ю.

Показання

Прямий тест Кумбса, що виявляє антитіла, що закріплені на поверхні еритроцитів, призначається при гемолітичних реакціях (руйнуванні еритроцитів) різного походження. Дослідження показано при первинній аутоімунній гемолітичній анемії, посттрансфузійній гемолітичній анемії, гемолітичній хворобі новонародженого, гемолізі еритроцитів, викликаному аутоімунними, пухлинними або інфекційними захворюваннями, а також прийомом лікарських засобівнаприклад, хінідину, метилдопи, прокаїнаміду. Непрямий тест Кумбса, що визначає антитіла в плазмі, використовується для попередження розвитку резус-конфлікту. Він показаний пацієнтам при підготовці до гемотрансфузій, а також вагітним із негативним резус-фактором за умови, що майбутній батько дитини має позитивний резус-фактор.

З метою визначення резус-сумісності тест Кумбса не призначається пацієнтам із резус-позитивною кров'ю. У цих випадках на поверхні еритроцитів вже є антигени, вироблення антитіл не може бути спровоковано гемотрансфузією або потраплянням крові плода в кровотік вагітної. Також дослідження не показане вагітним жінкам, якщо обидва батьки мають негативний резус-фактор – рецесивна ознака, що передається у спадок. Дитина у таких парах завжди має резус-негативну кров, імунологічний конфлікт із матір'ю неможливий При гемолітичних патологіях антиглобулінова проба не використовується з метою контролю за успішністю терапії, оскільки результати не відображають активність процесу руйнування еритроцитів.

Обмеженням тесту Кумбса є трудомісткість процедури дослідження – для отримання достовірних результатів необхідне дотримання температурних та часових режимів, правил підготовки реагентів та біоматеріалу. До переваг тіста Кумбса належить його висока чутливість. При гемолітичній анемії результати цього аналізу залишаються позитивними, навіть якщо показники гемоглобіну, білірубіну та ретикулоцитів нормалізуються.

Підготовка до аналізу та забір матеріалу

Матеріалом до виконання тесту Кумбса є венозна кров. Спеціальних вимог на час проведення процедури забору крові та підготовки пацієнта немає. Як і при будь-якому дослідженні рекомендується витримати перерву після їди не менше 4 годин, а в останні 30 хвилин відмовитися від куріння, фізичних навантажень, уникати емоційного напруження. Також варто заздалегідь обговорити з лікарем необхідність відміни ліків, що приймаються – деякі препарати можуть спотворити результати тесту Кумбса. Кров беруть за допомогою шприца з ліктьової вени, рідше з вени на тильній стороні кисті. Протягом кількох годин матеріал доставляється до лабораторії.

При виконанні прямого тесту Кумбса до сироватки крові пацієнта додається антиглобулінова сироватка. Через деякий час суміш досліджується на наявність аглютинатів – вони утворюються, якщо на еритроцитах є антитіла. При позитивному результаті визначається аглютинуючий титр. Непрямий тест Кумбса складається з більшої кількості етапів. Спочатку антитіла, що знаходяться в сироватці, під час інкубації фіксуються на введених еритроцитах. Потім до зразка додається антиглобулінова сироватка, через деякий час визначається наявність та титр аглютинатів. Строки виконання аналізу – 1 день.

Нормальні результати

У нормі результат прямого тесту Кумбса негативний (-). Це означає, що в крові немає антитіл, пов'язаних з еритроцитами, і вони не можуть бути причиною гемолізу. Нормальний результат непрямого тесту Кумбса також негативний (-), тобто антитіла до резус-фактора в плазмі відсутні. При підготовці до гемотрансфузії для реципієнта це означає сумісність з кров'ю донора, моніторинг вагітності – відсутність резус-сенсибілізації матері, низький ризик розвитку імунологічного конфлікту. Фізіологічні чинники, такі як особливості харчування чи фізичної активності, що неспроможні вплинути на результат проби. Тому, якщо результат позитивний, необхідна консультація лікаря.

Діагностичне значення аналізу

Позитивний результат тесту Кумбса виражається якісно, ​​від (+) до (++++) або кількісно, ​​титрами від 1:16 до 1:256. Визначення концентрації антитіл на еритроцитах та у сироватці крові виконується в обох видах проби. При позитивному результаті прямого тесту Кумбса на зовнішній мембрані еритроцитів виявляються антитіла, що призводять до руйнування цих клітин крові. Причиною може стати переливання крові без попереднього типування – посттрансфузійна гемолітична реакція, а також еритробластоз новонародженого, гемолітична реакція внаслідок застосування ліків, первинна або вторинна аутоімунна гемолітична анемія. Вторинне руйнування еритроцитів може бути спричинене системним червоним вовчаком, синдромом Еванса, макроглобулінемією Вальденстрема, пароксизмальною холодовою гемоглобінурією, хронічним лімфолейкозом, лімфомою, інфекційним мононуклеозом, сифілімоном, мікоплазм.

Позитивний результат непрямого тесту Кумбса свідчить про наявність у плазмі антитіл до резус-фактору. Насправді це означає, що відбулася резус-сенсибілізація, існує можливість розвитку резус-конфлікту після вливання крові донора, під час вагітності. Для запобігання ускладненням вагітності жінки з позитивним результатом тесту Кумбса ставляться на спеціальний облік.

Лікування відхилень від норми

Тест Кумбса відноситься до ізосерологічних досліджень. Його результати дозволяють виявити гемолітичну реакцію, а також визначити сумісність крові донора та реципієнта, матері та плода, щоб запобігти розвитку резус-конфлікту. Якщо результат проби позитивний, то необхідно звернутися за консультацією до лікаря – акушера-гінеколога, гематолога, хірурга.

У нормі антитіла до еритроцитів у крові відсутні.

Пряма проба Кумбса - антиглобуліновий тест (аглютинація в гелі, що дозволяє виявити повні двовалентні антитіла), за допомогою якого визначають антитіла класу IgG і С3-компонент комплементу на поверхні еритроцитів. Зазвичай антитіла, що виявляються прямою пробою Кумбса, мають широку специфічність, не асоційовану з добре встановленим антигеном. Позитивна пряма проба Кумбса чітко вказує на наявність у хворого на гемолітичну анемію, хоча не всі хворі з позитивним прямим антиглобуліновим тестом страждають на це захворювання. Приблизно у 10% хворих на антитіло або компоненти комплементу на мембрані еритроцитів не вдається визначити прямою пробою Кумбса (тест негативний), проте вони страждають на аутоімунну гемолітичну анемію. Для уточнення специфічності антитіл у таких випадках використовують тести з їх елюцією. Пряма проба Кумбса, позитивна тільки до комплементу, зазвичай має відношення до холодових антитіл типу IgM. У цьому випадку антитіла IgM відсутні на еритроцитах при базальній температурі тіла. Однак внаслідок того, що антитіла IgM активно фіксують комплемент, і комплемент залишається на еритроцитах, при даній формі аутоімунної гемолітичної анемії (хвороба холодових аггютининов) проба Кумбса буде позитивною тільки до комплементу.

Пряма проба Кумбса позитивна при аутоімунній гемолітичній анемії, що викликається тепловими антитілами, аутоімунної лікарської анемії (при прийомі метилдофа до 20% хворих мають позитивну реакцію), лікарсько-адсорбційному типі гемолітичної анемії, імунокомплексному типі гемолітичної анемії аутоімунної гемолітичної анемії, що викликається холодовими антитілами - хвороби холодових аглютинінів (проба позитивна лише стосовно С3). При пароксизмальній холодовій гемоглобінурії пряма проба Кумбса негативна.

Непряма проба Кумбса - непрямий антиглобуліновий тест (виявляє неповні антитіла) дозволяє виявити атипові антитіла в крові, зокрема алоантитіла, до чужих антигенів еритроцитів. Свою назву (непряма) вона отримала внаслідок того, що протікає у 2 етапи. Спочатку сироватка крові хворого, що містить неповні антитіла, взаємодіє з доданим корпускулярним Аг-діагностикумом без видимих ​​проявів. На другому етапі внесена антиглобулінова сироватка взаємодіє з неповними антитілами, адсорбованими на антигенах, з появою видимого осаду. Переливання гомологічних (алогенних) еритроцитів або вагітність - найбільш часті причиниутворення цих антиеритроцитарних антитіл Поєднання позитивної непрямої проби Кумбса з негативною прямою пробою нічого не дає для діагностики аутоімунної гемолітичної анемії. Позитивна непряма проба Кумбса викликає певні труднощі при доборі крові для переливання та проведення перехресної проби на сумісність із консервованою кров'ю, але не має іншого діагностичного значення.

Проба Кумбса - це специфічний лабораторний тест, який дозволяє визначити антитіла, що знаходяться в або на поверхні еритроциту. Ця процедурадозволяє діагностувати імунну у тому числі у новонароджених, а також виявити гемолітичні трансфузійні реакції. Проба Кумбса активно застосовується у судовій медицині та науковій генетиці з метою визначення еритроцитарних антигенів. Дотримання всіх правил здійснення такого аналізу дає змогу отримати максимально достовірний результат.

Ціль антиглобулінового тесту

Проба Кумбса пряма дозволяє виявити антиеритроцитарні антитіла, що фіксуються на еритроцитах. Позитивна реакція при подібному дослідженні вказує на розвиток аутоімунної Слід зазначити, що негативний результат не виключає наявності, оскільки антитіла нерідко знаходяться у вільному вигляді, тобто не мають зв'язку з еритроцитами. У таких випадках доцільно провести непряму пробу Кумбса, яка дозволить визначити автономні речовини в

Як проводиться аналіз?

абор венозної кровіу пацієнта здійснюють вранці натщесерце, незважаючи на те, що будь-яких істотних факторів, що впливають на кінцевий результат подібного тесту, не виявлено. Зберігати взятий матеріал дозволяється при температурі від 2 до 8 ° С не більше семи днів. Для того, щоб показники даного дослідженнябули максимально точними, цільну кров протягом перших двох годин необхідно доставити до лабораторії. В ідеалі проба Кумбса має показувати негативний результат, що вказує на відсутність гемолітичних змін в організмі.

Розшифрування підсумкових показників

Проба Кумбса є досить трудомістким методом дослідження, який потребує ретельного та точного виконання. При використанні такого тесту можуть зустрічатися деякі складнощі, пов'язані з неправильною інтерпретацією остаточних результатів через слабкий прояв позитивних реакцій. Слід зазначити, що недостовірність аналізу – а саме позитивна проба Кумбса – може стати наслідком неефективного відмивання еритроцитів, контакту з жирною.
поверхнею, а також нейтралізації антиглобулінових реагентів компонентами

сироватки. p align="justify"> Ще одним недоліком такого методу дослідження є нестійкість взятого матеріалу, зберігання якого має певні особливості.

Причиною хибно-негативного результату може стати надмірне струшування суспензії еритроцитів при ресуспендуванні. Помилкові результати можуть бути обумовлені присутністю домішок антикомплементарних антитіл, які адсорбуються при інкубації на поверхні тестованих еритроцитів, в результаті чого створюється видимість позитивного результату. Якщо ретельно відмивати досліджувані зразки та контролювати умови проведення реакції, зазначені недоліки можуть бути легко усунені, що підвищить шанси отримання максимально достовірних показників проби Кумбса.

Гемолітичні анемії, Викликані аутоімунними тілами, які спрямовані проти власних еритроцитів, точно не з'ясовані. Однак передбачається, що якісь фактори (наприклад, вірус, ненормальний білок) так змінюють еритроцити, що організм сприймає їх уже як щось чуже і вступає з ними в боротьбу за допомогою антитіл. За іншою теорією, спрямовані проти еритроцитів антитіла виникають майже випадково в процесі утворення ненормальних білкових тіл плазми при деяких хворобах. Такі білкові тіла, так само «випадково», можуть дати реакції, які можна використовувати для встановлення діагнозу (наприклад, вірусна пневмонія, як відомо, дає позитивну реакцію Вассермана, позитивну реакцію Пауль - Буннеля і реакцію холодової аглютинації).

Є два головного типу аутоантитілпри гемолітичних анеміях, а саме: теплові антитіла (реагують при 37°) та холодові антитіла (реактивна здатність яких посилюється при наближенні температури до нуля). Теплові антитіла зустрічаються частіше за Холодові. Dacie виявив, що теплові гемолізини зустрічаються в 2 рази частіше, ніж холодові. Гемолізини та аглютиніни не є принципово різними антитілами: вони відрізняються лише характером їхньої дії. Аглютинини аглютинують еритроцити, а гемолізини роблять їх більш схильними до складного процесу гемолізу (комплемент!). Аутоантитіла, фіксуючись на еритроцитах, утворюють комплекс еритроцитів – глобін. Цей комплекс виявляється за допомогою антиглобінової проби Кумбса.

Проба Кумбсапроводиться із сироваткою Кумбса, для приготування якої сенсибілізують кролика сироваткою людини, проти якої у сироватці кролика утворюються антитіла. При дії такої сенсибілізованої сироватки на еритроцити людини настає їхня аглютинація, якщо рецептори еритроцитів зайняті блокуючими антитілами. Так як ці блокуючі антитіла походять із сироватки людини, вони дають аглютинацію із сироваткою кролика, сенсибілізованою до плазми людини і містить преципітини. Ця реакція названа пробою Кумбса; для гемолітичної анемії на ґрунті аутоімунних тіл (Lo tit) вона майже специфічна (подробиці див. у Maier).

Загалом при гемолітичних анеміяхз первинним порушенням еритроцитів проба Кумбса негативна, а при набутих – позитивна. Однак з цього правила є деякі винятки: хибнопозитивна проба Кумбса знайдена при кризах конституційних гемолітичних анемій, а слабкою мірою - також іноді після спленектомії, при ревматичному поліартриті, саркоїдозі, після частих переливань крові і при системному червоному вовчаку. Природно, що з набутих гемолітичних анеміях без утворення аутоімунних тіл вона негативна.

Гемолітичні анемії, Викликані аутоімунними тілами, можна підрозділити на:
а) гострі, підгострі та хронічні форми, а також на
б) ідіопатичні з невідомою етіологією і в) симптоматичні [вірусна пневмонія (тільки холодові аглютиніни), хронічний лімфатичний лейкоз, ретикулосаркома, лімфосаркома, системний червоний вовчак Miescher з співробітниками)).
в) симптоматичні [вірусна пневмонія (тільки холодові аглютинини), хронічний лімфатичний лейкоз, ретикулосаркома, лімфосаркома, системний червоний вовчак (переважно теплові, рідше холодові аглютинини), сифіліс (холодові аглютини)

Клініка гемолітичних анемій, що розвиваються під дією аутоімунних тіл, дуже різноманітна, і навряд чи тому можна намалювати їх загальну клінічну картину. Уражаються особи різного віку та обох статей поступово. Все ж таки ідіопатичні форми начебто частіше спостерігаються у жінок (Sacks і Workman).

Клінічна картина ідіопатичної формизмінюється залежно від тяжкості захворювання. У хронічних випадках початок поступово, хвороба тягнеться багато років із частими загостреннями. Тяжкість анемії різна в залежності від ступеня гемолізу. Спостерігаються падіння гемоглобіну до 10%, в інших випадках гемоглобін довго утримується на 50-60%. Інтенсивність ретикулоцитозу та жовтяничного забарвлення шкіри та сироватки відповідає ступеню гемолізу. Білірубін у сечі знаходять дуже рідко, оскільки він не проходить через нирки, але гемоглобінурія спостерігається. Селезінка в хронічних випадках частіше збільшена і може навіть досягати дуже значних розмірів, в інших випадках вона ще промацується. Печінка рідко коли не збільшена.

У крові у більшості випадківспостерігається макроцитоз, гострих стадіяхтакож багато мікроцитів, рідко відсутні нормобластоз та поліхромазія, лейкоцитоз може досягати 30 000, тромбоцити в нормі. У деяких випадках, однак, є виражена тромбоцитопенія. Evans пояснює ці випадки одночасною наявністю антитіл проти тромбоцитів, так що є одночасно гемолітична анемія і тромбоцитопенія на грунті дії аутоімунних тел-синдромЕванса (Evans). Осмотична резистентність злегка знижена, але не такою мірою і не так постійно, як при конституціональній кулястоклітинній анемії. Проба на стійкість до нагрівання (Hegglin-Maier) після 6 годин також може дати незначний гемоліз (власне спостереження), але меншою мірою, ніж анемія Маркіафава. У сечі знаходять також гемосидерин (власне спостереження).