Anemia hemolítica autoimune. Teste de Coombs. Teste de Coombs Teste de Coombs positivo em recém-nascido

Existe um grande número de antígenos na superfície dos glóbulos vermelhos. Dependendo do tipo destes antígenos, distinguem-se os grupos sanguíneos. Os grupos mais estudados são ABO, Rh, Kell, Duffy e muitos outros...

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Descrição do estudo

Preparando-se para o estudo: O sangue é retirado de uma veia e então o soro (plasma sanguíneo sem fibrinogênio) é obtido por coagulação natural ou por precipitação de fibrinogênio. Material de teste: Tomando sangue

Existe um grande número de antígenos na superfície dos glóbulos vermelhos. Dependendo do tipo desses antígenos, distinguem-se os grupos sanguíneos. Os grupos mais estudados são ABO, Rh, Kell, Duffy e muitos outros sistemas. Normalmente, existem anticorpos para antígenos de outro grupo no sangue, mas durante transfusões de sangue, gravidez, doenças autoimunes, etc. são detectados anticorpos para seus próprios antígenos.

Método

A reação indireta de Coombs baseia-se na detecção de aglutinação (aglomeração) de hemácias que apresentam anticorpos incompletos na superfície, que surge quando é adicionado soro antiglobulina.

Na primeira etapa, os glóbulos vermelhos do doador (grupo O(I), Rh+) ​​​​e o soro teste são adicionados em um tubo de ensaio. Se anticorpos incompletos contra glóbulos vermelhos estiverem presentes no soro testado, eles serão fixados na superfície dos glóbulos vermelhos do doador.

Na segunda etapa, glóbulos vermelhos doados com anticorpos (se houver) e soro antiglobulina padrão com anticorpos para imunoglobulinas humanas são aplicados no vidro. Se no primeiro estágio os anticorpos contra os glóbulos vermelhos são fixados na superfície dos glóbulos vermelhos, então, quando o soro padrão é adicionado, os glóbulos vermelhos se unem devido à interação dos anticorpos.

Valores de referência - norma
(Teste de Coombs indireto (teste de antiglobulina, detecção de anticorpos antieritrocitários incompletos), sangue)

As informações relativas aos valores de referência dos indicadores, bem como a composição dos indicadores incluídos na análise, podem diferir ligeiramente dependendo do laboratório!

Norma:

Normalmente, não deve haver anticorpos contra os próprios glóbulos vermelhos. Quando o teste de Coombs é realizado, não ocorre agregação de glóbulos vermelhos;

Indicações

Pesquisa de humor imunidade específica se houver suspeita de reações autoimunes no organismo, conflito Rh entre mãe e feto, determinando a compatibilidade do sangue do doador e do receptor

Valores crescentes (resultado positivo)

Anticorpos para glóbulos vermelhos são detectados quando:

1. Anemia hemolítica autoimune

2. Doença hemolítica do recém-nascido

3. Doenças sistêmicas do tecido conjuntivo

4. Hepatite crônica ativa, etc.

Teste de Coombs

Teste de Coombs– um teste de antiglobulina que visa identificar no sangue Rh negativo anticorpos antieritrocitários incompletos para o fator Rh - uma proteína específica que está localizada na superfície dos eritrócitos do sangue Rh positivo. Existem dois tipos deste teste: direto - detecção de anticorpos na superfície dos glóbulos vermelhos, indireto - detecção de anticorpos no soro sanguíneo. Os testes diretos são realizados no diagnóstico e acompanhamento do tratamento de doenças do sangue: anemia hemolítica, doença hemolítica recém-nascidos e outros. Um teste indireto é realizado para avaliar a compatibilidade do sangue do doador e do receptor durante a transfusão, bem como para determinar a presença e o risco de conflito Rh no planejamento e manejo da gravidez. O material para o teste de Coombs é o sangue venoso; o estudo é realizado por métodos baseados na reação de aglutinação. Normalmente, ambos os testes dão um resultado negativo. A análise é concluída em um dia.

Teste de Coombs – ensaio clínico Sangue Rh negativo, destinado a detectar anticorpos contra o fator Rh. O teste é usado para identificar o risco de desenvolver conflito Rh e reações hemolíticas. Em cada pessoa, a superfície dos glóbulos vermelhos contém um determinado conjunto de antígenos ou aglutinogênios - compostos de várias naturezas, cuja presença ou ausência é usada para determinar o tipo sanguíneo e o fator Rh. Existem muitos tipos de antígenos, incluindo prática médica Os aglutinogênios A e B, que determinam o grupo sanguíneo, e o aglutinogênio D, o fator Rh, são de maior importância prática. Com fator Rh positivo, os antígenos D são detectados na membrana externa dos eritrócitos, mas com fator negativo, não.

O teste de Coombs, também chamado de teste de antiglobulina, tem como objetivo detectar anticorpos antieritrocitários incompletos para o sistema do fator Rh no sangue. Os anticorpos para o fator Rh são imunoglobulinas específicas que são produzidas no sangue Rh negativo quando as hemácias com aglutinogênios D entram nele. Isso pode acontecer quando o sangue do feto e da gestante é misturado, durante transfusões de sangue realizadas sem sangue prévio. digitando. O teste de Coombs existe em duas versões – direta e indireta. Ao realizar um teste de Coombs direto, são detectados anticorpos ligados à superfície dos glóbulos vermelhos. O estudo é usado para determinar a causa da reação hemolítica. O teste indireto de Coombs visa detectar anticorpos antieritrocitários no plasma sanguíneo. É necessário determinar a compatibilidade do sangue entre doador e receptor ou mãe e feto, e ajuda a prevenir o desenvolvimento de conflito Rh e subsequente hemólise dos glóbulos vermelhos.

O sangue para ambas as versões do teste de Coombs é retirado de uma veia. A análise é realizada por aglutinação com soro antiglobulina. Os resultados do estudo são utilizados em hematologia para identificar as causas das reações hemolíticas, em cirurgia e reanimação na realização de transfusões de sangue, em obstetrícia e ginecologia no monitoramento de gestações em mulheres com sangue Rh negativo.

Indicações

O teste direto de Coombs, que detecta anticorpos ligados à superfície dos glóbulos vermelhos, é prescrito para reações hemolíticas (destruição dos glóbulos vermelhos) de diversas origens. O estudo é indicado para anemia hemolítica autoimune primária, anemia hemolítica pós-transfusional, doença hemolítica do recém-nascido, hemólise de eritrócitos causada por doenças autoimunes, tumorais ou doenças infecciosas, bem como recepção medicação, por exemplo, quinidina, metildopa, procainamida. O teste indireto de Coombs, que determina anticorpos no plasma sanguíneo, é usado para prevenir o desenvolvimento de conflito Rh. É indicado para pacientes em preparação para transfusões de sangue, bem como para gestantes com fator Rh negativo, desde que o futuro pai da criança tenha fator Rh positivo.

Para determinar a compatibilidade Rh, o teste de Coombs não é prescrito para pacientes com sangue Rh positivo. Nestes casos, já existem antígenos na superfície das hemácias; a produção de anticorpos não pode ser provocada pela transfusão de sangue ou pela entrada de sangue fetal na corrente sanguínea da gestante. Além disso, o estudo não é indicado para gestantes se ambos os pais apresentarem fator Rh negativo – traço recessivo hereditário. Uma criança nesses casais sempre tem Sangue Rh negativo, um conflito imunológico com a mãe é impossível. Nas patologias hemolíticas, o teste de antiglobulina não é utilizado para monitorar o sucesso da terapia, pois os resultados não refletem a atividade do processo de destruição das hemácias.

Uma limitação do teste de Coombs é a laboriosidade do procedimento de pesquisa - para obter resultados confiáveis, é necessário observar as condições de temperatura e tempo, regras de preparo de reagentes e biomateriais. As vantagens do teste de Coombs incluem sua alta sensibilidade. Na anemia hemolítica, os resultados deste teste permanecem positivos, mesmo que os níveis de hemoglobina, bilirrubina e reticulócitos estejam normais.

Preparação para análise e coleta de material

O material utilizado para realizar o teste de Coombs é o sangue venoso. Não há requisitos especiais para o momento do procedimento de coleta de sangue e para o preparo do paciente. Como em qualquer estudo, é recomendado fazer uma pausa após comer por pelo menos 4 horas e parar de fumar nos últimos 30 minutos. atividade física, evite estresse emocional. Também vale a pena discutir com antecedência com seu médico a necessidade de interromper o uso de medicamentos - alguns medicamentos podem distorcer os resultados do teste de Coombs. O sangue é coletado com uma seringa da veia cubital ou, menos frequentemente, de uma veia no dorso da mão. Em poucas horas, o material é entregue ao laboratório.

Ao realizar um teste de Coombs direto, soro antiglobulina é adicionado ao soro sanguíneo do paciente. Depois de algum tempo, a mistura é examinada quanto à presença de aglutinados - eles são formados se houver anticorpos nos glóbulos vermelhos. Se o resultado for positivo, determina-se o título aglutinante. O teste indireto de Coombs consiste em mais etapas. Primeiro, os anticorpos presentes no soro são fixados nas hemácias injetadas durante a incubação. Em seguida, adiciona-se soro antiglobulina à amostra, após algum tempo determina-se a presença e o título de aglutinados. O período de análise é de 1 dia.

Resultados normais

Normalmente, o resultado do teste direto de Coombs é negativo (-). Isso significa que não existem anticorpos associados aos glóbulos vermelhos no sangue e eles não podem causar hemólise. O resultado normal do teste indireto de Coombs também é negativo (-), ou seja, não há anticorpos para o fator Rh no plasma sanguíneo. Na preparação para a transfusão de sangue da receptora, isso significa compatibilidade com o sangue do doador no acompanhamento da gravidez, isso significa ausência de sensibilização Rh da mãe, baixo risco de desenvolver conflito imunológico; Fatores fisiológicos, como dieta ou atividade física, não podem afetar o resultado do teste. Portanto, se o resultado for positivo, é necessária uma consulta médica.

Valor diagnóstico da análise

Um resultado positivo do teste de Coombs é expresso qualitativamente, de (+) a (++++), ou quantitativamente, por títulos de 1:16 a 1:256. A determinação da concentração de anticorpos nas hemácias e no soro sanguíneo é realizada em ambos os tipos de amostras. Se o teste direto de Coombs for positivo, são detectados anticorpos na membrana externa dos glóbulos vermelhos, o que leva à destruição desses glóbulos. A causa pode ser transfusão de sangue sem tipagem prévia - reação hemolítica pós-transfusional, bem como eritroblastose do recém-nascido, reação hemolítica por uso de medicamentos, anemia hemolítica autoimune primária ou secundária. A destruição secundária de glóbulos vermelhos pode ser causada por lúpus eritematoso sistêmico, síndrome de Evans, macroglobulinemia de Waldenström, hemoglobinúria paroxística fria, leucemia linfocítica crônica, linfoma, mononucleose infecciosa, sífilis, pneumonia por micoplasma.

Um resultado positivo do teste indireto de Coombs indica a presença de anticorpos contra o fator Rh no plasma. Na prática, isso significa que ocorreu sensibilização ao Rh e existe a possibilidade de desenvolver conflito Rh após a infusão de sangue do doador durante a gravidez. Para evitar complicações na gravidez, as mulheres com resultado positivo no teste de Coombs são colocadas em um registro especial.

Tratamento de anormalidades

O teste de Coombs refere-se a estudos isoserológicos. Seus resultados permitem identificar reação hemolítica, bem como determinar a compatibilidade do sangue do doador e receptor, mãe e feto, a fim de prevenir o desenvolvimento de conflito Rh. Se o resultado do teste for positivo, você deverá consultar o seu médico assistente - obstetra-ginecologista, hematologista, cirurgião.

Normalmente, não existem anticorpos contra os glóbulos vermelhos no sangue.

O teste direto de Coombs é um teste de antiglobulina (aglutinação em gel que permite a detecção de anticorpos divalentes completos), que detecta anticorpos da classe IgG e o componente C3 do complemento na superfície dos glóbulos vermelhos. Normalmente, os anticorpos detectados pelo teste direto de Coombs têm uma especificidade ampla que não está associada a um antígeno bem estabelecido. Um teste direto de Coombs positivo indica claramente que o paciente tem anemia hemolítica, embora nem todos os pacientes com teste direto de antiglobulina positivo sofram desta doença. Em aproximadamente 10% dos pacientes, os anticorpos ou componentes do complemento na membrana dos glóbulos vermelhos não podem ser determinados por um teste de Coombs direto (o teste é negativo), mas mesmo assim eles sofrem de anemia hemolítica autoimune. Para esclarecer a especificidade dos anticorpos nesses casos, são utilizados testes com sua eluição. Um teste de Coombs direto, positivo apenas para complemento, geralmente refere-se a anticorpos frios do tipo IgM. Neste caso, os anticorpos IgM não estão presentes nos glóbulos vermelhos à temperatura corporal basal. No entanto, devido ao fato de os anticorpos IgM fixarem ativamente o complemento, e o complemento permanecer nos glóbulos vermelhos, com esta forma de anemia hemolítica autoimune (doença da agutinina fria), o teste de Coombs será positivo apenas para complemento.

O teste direto de Coombs é positivo para anemia hemolítica autoimune causada por anticorpos quentes, anemia autoimune induzida por drogas (ao tomar metildopa, até 20% dos pacientes têm uma reação positiva), tipo de anemia hemolítica por adsorção de drogas, tipo de complexo imunológico de hemolítica anemia (o teste é positivo apenas para C3), com anemia hemolítica autoimune causada por anticorpos frios - doença das aglutininas frias (o teste é positivo apenas para C3). Na hemoglobinúria paroxística pelo frio, o teste direto de Coombs é negativo.

Teste de Coombs indireto - um teste indireto de antiglobulina (detecta anticorpos incompletos) permite identificar anticorpos atípicos no sangue, incluindo aloanticorpos para antígenos eritrocitários estranhos. Recebeu esse nome (indireto) pelo fato de ocorrer em 2 etapas. Inicialmente, o soro sanguíneo do paciente, contendo anticorpos incompletos, interage com o Ag diagnosticum corpuscular adicionado sem manifestações visíveis. Na segunda etapa, o soro antiglobulina adicionado interage com anticorpos incompletos, adsorvido em antígenos, com aparecimento de precipitado visível. A transfusão de hemácias homólogas (alogênicas) ou a gravidez são as mais razões comuns formação desses anticorpos anti-eritrócitos. A combinação de um teste de Coombs indireto positivo com um teste direto negativo não fornece nada para o diagnóstico de anemia hemolítica autoimune. Um teste de Coombs indireto positivo causa certas dificuldades na seleção do sangue para transfusão e na realização de um teste cruzado de compatibilidade com o sangue preservado, mas não tem outro valor diagnóstico.

O teste de Coombs é um teste laboratorial específico que detecta anticorpos localizados dentro ou na superfície de um glóbulo vermelho. Este procedimento permite diagnosticar o sistema imunológico, inclusive em recém-nascidos, bem como identificar reações transfusionais hemolíticas. O teste de Coombs é usado ativamente na medicina forense e na genética científica para determinar antígenos eritrocitários. O cumprimento de todas as regras para a realização de tal análise permite obter o resultado mais confiável.

Objetivo do teste de antiglobulina

O teste direto de Coombs permite detectar anticorpos antieritrócitos fixados nos glóbulos vermelhos. Uma reação positiva em tal estudo indica o desenvolvimento de uma doença autoimune. Ressalta-se que um resultado negativo não exclui a presença de anticorpos, uma vez que os anticorpos são frequentemente encontrados na forma livre, ou seja, não têm ligação com sangue vermelho. células. Nestes casos, é aconselhável realizar um teste de Coombs indireto, que permitirá a determinação de substâncias autónomas em

Como é feita a análise?

abortar sangue venoso o paciente é realizado pela manhã com o estômago vazio, apesar de não terem sido encontrados fatores significativos que influenciam o resultado final desse teste. É permitido armazenar o material retirado em temperatura de 2 a 8 °C por no máximo sete dias. Para que os indicadores este estudo foram tão precisos quanto possível, o sangue total deve ser entregue ao laboratório nas primeiras duas horas. O ideal é que o teste de Coombs apresente resultado negativo, o que indica ausência de alterações hemolíticas no organismo.

Decodificando os indicadores finais

O teste de Coombs é um método de pesquisa bastante trabalhoso que requer uma execução cuidadosa e precisa. Ao utilizar tal teste, podem surgir algumas dificuldades associadas à interpretação incorreta dos resultados finais devido à fraca manifestação de reações positivas. De referir que a falta de fiabilidade da análise - nomeadamente, um teste de Coombs positivo - pode ser consequência da lavagem ineficaz dos glóbulos vermelhos, do contacto com gorduras
superfície, bem como neutralização de reagentes antiglobulina por componentes

sérum. Outra desvantagem deste método de pesquisa é a instabilidade do material retirado, cujo armazenamento apresenta certas características.

Um resultado falso negativo pode ser causado por agitação excessiva da suspensão de glóbulos vermelhos durante a ressuspensão. Resultados errôneos também podem ser devidos à presença de contaminantes de anticorpos anticomplementares, que são adsorvidos durante a incubação na superfície das hemácias testadas, resultando no aparecimento de um resultado positivo. Se as amostras de teste forem cuidadosamente lavadas e as condições de reação forem controladas, essas deficiências podem ser facilmente eliminadas, o que aumentará as chances de obter resultados de teste de Coombs mais confiáveis.

Anemia hemolítica, causada por corpos autoimunes direcionados contra seus próprios glóbulos vermelhos, não são compreendidos com precisão. No entanto, presume-se que alguns fatores (por exemplo, um vírus, uma proteína anormal) alteram os glóbulos vermelhos de tal forma que o corpo os percebe “como algo estranho” e os combate com a ajuda de anticorpos. De acordo com outra teoria, os anticorpos dirigidos contra os glóbulos vermelhos surgem quase acidentalmente durante a formação de corpos proteicos plasmáticos anormais em algumas doenças. Tais corpos proteicos, igualmente “aleatoriamente”, podem produzir reações que podem ser usadas para fazer um diagnóstico (por exemplo, a pneumonia viral, como se sabe, produz uma reação de Wasserman positiva, uma reação de Paul-Bunnel positiva e uma reação de aglutinação a frio). .

Existem dois principais tipos de autoanticorpos para anemia hemolítica, a saber: anticorpos quentes (reagem a 37°C) e anticorpos frios (cuja reatividade aumenta à medida que a temperatura se aproxima de zero). Anticorpos quentes são mais comuns que anticorpos frios. Dacie descobriu que as hemolisinas quentes ocorrem 2 vezes mais frequentemente do que as frias. As hemolisinas e as aglutininas não são anticorpos fundamentalmente diferentes: diferem apenas na natureza de sua ação. As aglutininas aglutinam os glóbulos vermelhos e as hemolisinas os tornam mais suscetíveis ao complexo processo de hemólise (complemento!). Os autoanticorpos, fixando-se nos eritrócitos, formam um complexo eritrócito-globina. Este complexo é detectado pelo teste de antiglobina de Coombs.

Teste de Coombs realizado com soro de Coombs, para cuja preparação o coelho é sensibilizado com soro humano, contra o qual se formam anticorpos no soro de coelho. Quando esse soro sensibilizado atua sobre os eritrócitos humanos, sua aglutinação ocorre se os receptores dos eritrócitos estiverem ocupados por anticorpos bloqueadores. Uma vez que estes anticorpos bloqueadores são derivados de soro humano, eles aglutinam com soro de coelho sensibilizado ao plasma humano e contendo precipitinas. Esta reação é chamada de teste de Coombs; para anemia hemolítica por corpos autoimunes (Lo tit) é quase específico (para detalhes, ver Maier).

Em geral para anemias hemolíticas no distúrbio primário dos eritrócitos, o teste de Coombs é negativo e, nos adquiridos, é positivo. No entanto, existem algumas exceções a esta regra: um teste de Coombs falso-positivo é encontrado durante crises de anemia hemolítica constitucional, e em grau fraco, também às vezes após esplenectomia, com artrite reumática, sarcoidose, após transfusões de sangue frequentes e com lúpus sistêmico eritematoso. Naturalmente, na anemia hemolítica adquirida sem formação de corpos autoimunes, é negativo.

Anemia hemolítica causadas por órgãos autoimunes podem ser divididas em:
a) aguda, subaguda e formas crônicas, bem como em
b) idiopática com etiologia desconhecida ec) sintomática [pneumonia viral (apenas aglutininas frias), leucemia linfática crônica, reticulosarcoma, linfossarcoma, lúpus eritematoso sistêmico (principalmente aglutininas quentes, menos frequentemente aglutininas frias), sífilis (aglutininas frias), tumores ovarianos (Miescher com funcionários)).
c) sintomático [pneumonia viral (somente aglutininas frias), leucemia linfática crônica, reticulosarcoma, linfossarcoma, lúpus eritematoso sistêmico (principalmente aglutininas quentes, menos frequentemente aglutininas frias), sífilis (aglutininas frias), tumores ovarianos (Miescher e colaboradores)).

Clínica de anemia hemolítica, desenvolvendo-se sob a influência de órgãos autoimunes, são muito diversos e, portanto, dificilmente é possível traçar sua visão geral quadro clínico. Pessoas de todas as idades e de ambos os sexos são igualmente afetadas. Ainda assim, as formas idiopáticas parecem ser mais frequentemente observadas em mulheres (Sacks e Workman).

Quadro clínico da forma idiopática varia dependendo da gravidade da doença. Nos casos crônicos, o início é gradual, a doença dura muitos anos com exacerbações frequentes. A gravidade da anemia varia dependendo do grau de hemólise. Observam-se quedas de hemoglobina de até 10%; em outros casos, a hemoglobina permanece em 50-60% por muito tempo; A intensidade da reticulocitose e da coloração ictérica da pele e do soro corresponde ao grau de hemólise. A bilirrubina é muito raramente encontrada na urina, pois não passa pelos rins, mas é observada hemoglobinúria. Nos casos crônicos, o baço costuma estar aumentado e pode até atingir um tamanho muito significativo, mas em outros casos ainda pode ser sentido. O fígado raramente não está aumentado.

No sangue na maioria dos casos observa-se macrocitose, em estágios agudos há também muitos micrócitos, normoblastose e policromasia raramente estão ausentes, a leucocitose pode chegar a 30.000, as plaquetas são normais. Em alguns casos, entretanto, há trombocitopenia grave. Evans explica esses casos pela presença simultânea de anticorpos contra plaquetas, de modo que há tanto anemia hemolítica quanto trombocitopenia devido à ação de agentes autoimunes. síndrome de tel Evans. A resistência osmótica é ligeiramente reduzida, mas não na mesma extensão e não tão permanentemente como na anemia constitucional de células globulares. O teste de resistência ao calor (Hegglin-Maier) após 6 horas também pode causar leve hemólise (observação própria), mas em menor grau do que na anemia de Marchiafava. A hemossiderina também é encontrada na urina (observação própria).