Kan IF analizi. Nasıl yapılır ve enzim immunoassay neyi gösterir Kan örneklerinin ELISA ile incelenmesi

Frengi için treponemal testler. Genel açıklama.

Frengi için teşhis testleri yapılırken, çeşitli serolojik reaksiyonlar: aglütinasyon, çökelme, immünofloresans, kompleman fiksasyonu, enzim immünoassay, vb. Tüm bu serolojik reaksiyonlar etkileşime dayanır. antijenler ve antikorlar.

Spesifik serolojik testlere treponemal denir, çünkü bu testler soluk treponemalar veya bunların antijenlerini, yani treponemal kökenli antijenleri kullanır.

Treponemal testlerin amacı, sifilize neden olan ajanın antijenik yapılarına spesifik antikorları, yani spesifik olarak T. aureus'a karşı yönlendirilmiş antikorları tanımlamaktır.

Pallidum ve treponema tarafından zarar görmüş vücut dokularına karşı değil. IgM sınıfının spesifik antitreponemal antikorları, hastalığın ikinci haftasının sonunda tespit edilebilir.

De olduğu gibi treponemal olmayan testler, treponemal testler yapılırken antijen-antikor reaksiyonu kullanılır. Antijen-antikor reaksiyonunun sonuçlarını yürütmek ve tespit etmek için treponemal olmayan testlere göre daha karmaşık ve pahalı yöntemler kullanılır.

Sifilitik enfeksiyonun zamanında ve yüksek kalitede tanınması, şu anda treponemal testlerin yaygın olarak kullanılmaya başlanmasıyla ilişkilidir.

Treponemal testler, sifilizin varlığını doğrulamak için kullanılır - özellikle teşhis için gerekli olan treponemal olmayan testlerin sonuçlarını kontrol etmek için kullanılırlar. sifilizin gizli formları. Frengi saptamak için treponemal testler de kullanılır. erken aşamalar treponemal olmadığında kardiyolipin testleri(Wassermann reaksiyonu, mikro çökelme reaksiyonu vb.) negatiftir.

Treponemal testler sadece sifiliz tanısı için kullanılır ve iyileşmeyi izlemek için kullanılmaz, çünkü bazı hastalarda treponemal testler sifilizin tam tedavisinden sonra yıllarca pozitif kalabilir.

Ancak treponemal testler yapılırken az sayıda çalışmada yanlış pozitif sonuçlarözellikle hastanın enfeksiyöz mononükleoz, bağ dokusu hastalığı, cüzzam veya enjeksiyon uyuşturucu bağımlılığı gibi hastalıkları varsa.

Klinik özgüllük açısından treponemal testler, treponemal olmayan testlerle karşılaştırılabilir ve klinik duyarlılık açısından üstündür.

Yanlış pozitif sonuçların nedenleri

Wasserman reaksiyonu "akut" ve "kronik" yanlış pozitif sonuçları belirleyebilir. Şiddeti, kişinin durumundaki değişikliklerin doğasına bağlıdır. RW, bu gibi durumlarda alevlenme aşamasını gösterebilir:

• akut aşamada bulaşıcı hastalıklar;
• travmatik yaralar;
• miyokardiyal enfarktüs;
• testten birkaç gün önce herhangi bir aşının uygulanması;
• Gıda zehirlenmesi.

Frengi için test türleri

Frengi teşhisi bazı özelliklere sahiptir ve diğer bakteriyel enfeksiyonların teşhisinden farklıdır. Soluk treponemanın karmaşık yapısı ve antijenik özellikleri, serolojik test sonuçlarının yorumlanmasında hatalara neden olur.

Frengi için kan testi 3 ana hasta grubuna sunulmaktadır:

1. 1 Nüfus gruplarının taranması ve profilaktik tıbbi muayenesi (hamilelik, doğum öncesi kliniğine kayıt, istihdam ve tıbbi kitap kaydı vb. dahil).
2. 2 Risk gruplarında tarama (frengi bulaşmış bir kişiyle korunmasız cinsel ilişki, zorla cinsel ilişki sonrası kişiler, HIV ile enfekte vb.).
3. 3 Belirtileri olan veya frengi enfeksiyonu olduğundan şüphelenilen kişiler.

Tüm laboratuvar yöntemleri koşullu olarak doğrudan ve dolaylı olarak ayrılmıştır.

Doğrudan Yöntemler

1. 1 Karanlık alanda Treponema pallidum'un tanımlanması (karanlık alan mikroskobu).
2. 2 Deney hayvanlarının enfeksiyonu (laboratuar hayvanlarında kültürleme).
3. 3 PCR (polimeraz zincir reaksiyonu).
4. 4 DNA probu veya nükleik asit hibridizasyonu.

Dolaylı Yöntemler

Serolojik reaksiyonlar, soluk treponema antijenlerine (AH olarak kısaltılır) karşı antikorların (AT olarak kısaltılır) saptanmasına dayanan laboratuvar tanı yöntemleridir. Teşhisi doğrulamak için gereklidirler.

1. 1 Treponemal olmayan testler:
   • Wasserman reaksiyonu (RSK);
   • Mikroçökeltme reaksiyonu (MR, RMP) ve aşağıda verilen analogları;
   • Hızlı plazma reaktif testi (RPR, RPR);
   • Kırmızı toluidin ve serum (TRUST) ile test edin;
   • Cinsel yolla bulaşan hastalıkların incelenmesi için Laboratuvarın treponemal olmayan testi - VDRL.
2. 2 Treponemal testler:
   • Treponema pallidum - RIBT / RIT'in immobilizasyon oranı;
   • İmmünofloresan R-tionu - RIF, FTA (sera RIF-10, RIF-200, RIF-abs seyreltmesi);
   • Pasif hemaglutinasyon R-tionu (RPHA, TRPGA, TPHA);
   • ELISA (ELISA, ÇED);
   • İmmün lekeleme.

Şekil 1 - Frengi serodiagnoz algoritması

histomorfolojik yöntemler

Bu yöntemler, sifilitik belirtilerin histomorfolojisinin özelliklerini belirlemeye indirgenmiştir. Sert şansın yapısının inceliklerine dikkat edilir.

Fakat, ayırıcı tanı histoloji kullanarak enfeksiyon çok zordur. Histomorfoloji, diğer laboratuvar ve klinik testlerle birlikte kullanılır.

Yöntemler klinik araştırma her yıl hızla gelişiyor. Yeni teşhis yöntemlerinin geliştirilmesiyle, frengiye karşı yanlış pozitif reaksiyon daha az yaygın hale geliyor.

Gerekirse, teşhis birkaç farklı yöntem içerebilir - bu, en güvenilir sonucu almanızı sağlar.

Treponemal olmayan araştırma yöntemleri

Bu teknikler, soluk spiroketin aktivitesinin bir sonucu olarak oluşan proteinleri tanımlamayı amaçlamaktadır. Patojenin "izlerini" belirlemeyi amaçlarlar.

Bu tür yöntemler nispeten yüksek bir hata yüzdesine sahiptir (% 10'a kadar). Bu tür teknikler spesifik değildir, ancak enfeksiyon derecesinin antikor titresi tarafından belirlenmesine izin verir.

Wasserman reaksiyonu RW

Soluk treponemayı saptamak için yapılan en yaygın test serolojik bir kan testidir. Wasserman reaksiyonu, hastalığın varlığını sadece birkaç dakika içinde belirlemenizi sağlar.

Bu nedenle, bu teknik en çok laboratuvarlarda kullanılır - fazla zaman gerektirmez ve nispeten düşük bir maliyeti vardır.

Analizi yapmak için beyin omurilik sıvısı veya kan kullanılır. Test materyali bir parmaktan (sadece bir analiz varsa) veya bir damardan (birkaç çalışma gerekiyorsa) alınabilir.

Analiz sonucunda sadece yanlış pozitif değil, aynı zamanda yanlış negatif de olabilir. Aşağıdaki koşullar altında mümkündür:

• vücuttaki treponema sayısının hala düşük olduğu enfeksiyonun erken evresi;
• antikor sayısı azaldığında remisyon aşamasında kronik hastalık.

Hastalığı tespit etmek için çeşitli yöntemler ve biyomateryaller kullanılmaktadır. Erken aşamalarda, sifiliz bakteriyoskopik bir test kullanılarak belirlenir.

Numuneler mikroskop altında incelenir. Cihaz, patojen suşlarını tespit etmenizi sağlar.

Daha sonra serolojik testler yapılır. Onlar sayesinde numunelerde hastalığa karşı antijenler ve antikorlar tespit edilir.

Cinsel enfeksiyonu belirleme yöntemleri 2 kategoriye ayrılır:

• Doğrudan, patojenik bir mikroorganizmayı ortaya çıkaran. Bunlar şunları içerir: karanlık alan mikroskopisi, RIT analizi (araştırma için tavşanların biyomateryal ile enfeksiyonu), PCR yöntemi - polimeraz zincir reaksiyonu (yardımıyla patojenin genetik unsurları bulunur).
• Bir patojene karşı antikorların dolaylı (serolojik) tespiti. Enfeksiyona yanıt olarak bağışıklık sistemi tarafından üretilirler.

Serolojik yöntemler 2 kategoriye ayrılır: treponemal ve treponemal olmayan.

Treponemal olmayan, şunları içerir: toluidin kırmızı testi, CSC analizi, RPR testi, RMP ekspres yöntemiyle kan testi.

Treponemal, birleştirme: immünoblotlama, RSK testi, RIT analizi, RIF çalışması, RPGA testi, ELISA analizi.

Enfeksiyon testlerinin bilgilendiriciliği farklıdır. Frengi için serolojik yöntemleri içeren ana test türleri daha sık yapılır. Muayene olması gereken hastalar için, doktor testleri bireysel olarak reçete eder.

Araştırma için biyomateryal

Spiral gibi görünen ve frengiye neden olan bir patojen olan soluk treponemayı tanımlamak için örnekler alınır:

• venöz kan;
• likör (omurilik kanalından salgı);
• lenf düğümlerinin içeriği;
• ülser dokusu.

Frengi tespiti için test yapılması gerekiyorsa, sadece kübital damardan değil parmaktan da kan alınır. Biyomateryal seçimi ve araştırma yöntemi, enfeksiyonun ciddiyetinden ve teşhis merkezinin ekipmanından etkilenir.

Treponemayı tespit etmek için yapılan laboratuvar testlerine serodiagnoz denir. Frengi serodiagnozu geleneksel olarak iki gruba ayrılır:

• veren özel analizler pozitif örnek hastalığın iyileşmesinden sonra bile;
• Belirli bir zamanda bir hastalık varsa sonucu gösteren non-spesifik testler.

Frengi için yapılan testin adı nedir? Çalışmalar aşağıdakilere bağlı olarak 2 gruba ayrılır:

Spesifik analizler:

• Pasif aglütinasyon reaksiyonu anlamına gelen Syphilis rpga veya Treponema pallidum hemaglütinasyon olarak tercüme edilen sifiliz trna;
• RIF veya immünofloresan reaksiyonu;
• RIT veya treponema immobilizasyon reaksiyonu;
• Bağlantılı immünosorbent deneyi;
• Frengi veya immünoblot için immünoblot;

En ünlü treponemal testler şunlardır:

• Treponemal antijen (RSKt) ile tamamlayıcı sabitleme reaksiyonu (Wassermann reaksiyonu).
• İmmünofloresan reaksiyonu (RIF; Floresan treponemal antikor, FTA). Birkaç modifikasyonda kullanılır: RIF-200 (FTA-200); RIF-abs (FTA-abs; FTA-abs çift boyama; FTA-abs IgM; RIF-abs-IgM; 19S-IgM-FTA-abs); RIFts - tam kanla immünofloresan reaksiyonu.
• Pasif hemaglütinasyon testi (TPHA; Treponema pallidum hemaglutinasyon testi, TPHA).
• Frengi etken maddesinin antijenleri ile duyarlı hale getirilmiş jelatin partiküllerinin pasif aglütinasyon reaksiyonu (TPPA, Treponema pallidum partikül aglütinasyon testi)
• Enzim immün testi (ELISA; Enzyme Lynced Immunosorbent Assay, ELISA).
• IHL - immünokemilüminesan çalışma (ICL; Chemiluminescence immunoassays, CLIA)
• Treponema pallidum immobilizasyon reaksiyonu RIBT (RIT), yabancı literatürde TPI (Treponema pallidum immobilizasyon testi). İÇİNDE son yıllar giderek daha az ve sadece bilimsel amaçlarla ve araştırma laboratuvarlarında kullanılmaktadır.
• İmmunoblotlama (IB; Western Blot, Line Blot). Kural olarak, enzim immün testinin bir varyantı olan lineer bir immünoblotlama yöntemi kullanılır. Frengi etken maddesine karşı IgG ve IgM antikorlarını tespit etmek için iki versiyonda kullanılır.

IgM, IgG ve toplam sınıfların antikorları için pasif hemaglutinasyon testi (RPHA) ve enzim immunoassay (ELISA) evrensel öneme sahiptir ve hem tarama hem de tanıyı doğrulamak için kullanılır.

Bu teknikler basit ve ekonomiktir, tekrarlanabilirliği yüksektir ve otomatiktir. ELISA veya TPHA kullanırken, yeniden analizde ilk muayenede olduğu gibi aynı test sisteminin kullanılması bir ön koşuldur.

FTA (floresan treponemal antikor, FTA), florokrom etiketli anti-insan Ig serumu kullanılarak floresan mikroskopiyle antijen-antikor komplekslerinin görselleştirilmesine dayanır.

RIF, ELISA, immünoblotlama (IB) yöntemleri, enfeksiyon anından itibaren 3. haftadan itibaren T. pallidum antijenlerine (sifiliz ile test sonuçları pozitifleşir) ve daha önce, 7. –8. hafta.

Aglütinasyon reaksiyonunu kullanan dünya pratiğinde en yaygın spesifik treponemal testler arasında aşağıdakiler listelenebilir. TPHA'da (Treponema pallidum hemaglutinasyon testi, TPHA), mikrohemaglutinasyon testi (Treponema pallidum için mikrohemaglutinasyon testi, MHA-TP), pozitif sonuçla, treponemal antijenle duyarlılaştırılmış (tedavi edilmiş) eritrositlerin aglütinasyonu, antitreponemal antikorların varlığında gerçekleşir. TPRA (Treponema pallidum partikül aglütinasyonu) testinde taşıyıcı olarak lateks veya jelatin partiküllerinin kullanılması, bazı hastaların serumları tarafından eritrosit lizisi (zarlarının tahrip olması nedeniyle eritrositlerin imhası) durumunda bir stres testinin kullanılmasına izin verir. ve ayrıca reaktiflere stabilite verir.

Treponemal testler

Antijen	Yakalama sistemi	Ölçek
Canlı patojenik treponemalar	Canlı treponemanın askıya alınması	RIT, RIBT (treponema pallidum immobilizasyon reaksiyonu)
Bozulmamış treponemalar	Gözlük üzerine sabitlenmiş treponema	RIF (immünofloresan reaksiyonu), RIF-abs (absorpsiyonlu RIF), RIF-c, RIF ile kılcal kan bir parmaktan vb.
Treponemalar ultrasonla temizlenir ve yok edilir	Eritrositler ile ilişkili	RPHA (pasif hemaglütinasyon reaksiyonu)
	Jelatin parçacıkları ile ilişkili	Partikül aglütinasyon testi (TPPA)
		ELISA
		immünoblotlama
rekombinant	Mikroplaka kuyucuklarının yüzeyi ile ilişkili	rekombinant ELISA
	Poliakrilamid jel elektroforezi ile ayrılan ve Western blotlama ile zarlara aktarılan proteinler	Rekombinant antijenlerle immünoblotlama
	Lateks parçacıkları ile bağlı	lateks aglütinasyon

Direkt ve indirekt yöntemlerle hastalıkları teşhis etmek mümkündür. Soluk treponemanın kendisi yalnızca doğrudan bir yöntemle tespit edilir.

Dolaylı yöntem, spiroketlere karşı antikorları tespit eder. Antikorlar bulunursa, bu, vücutta bir spiroketin varlığını doğrular.

Dolaylı teşhis yöntemleri, çalışmanın amacı kan serumu olan serolojik reaksiyonları içerir.

Antikorlar, antijenlerle temasları sırasında tespit edilebilir. Bu nedenle, belirli bir antijeni içeren maddeler serolojik bir reaksiyon yürütmek için kullanılır. Bu antijenin türüne göre, reaksiyonlar treponemal ve treponemal olmayan olarak ayrılır:

• Treponemal reaksiyon, treponema antijenlerine karşı antikorların saptanması ile gerçekleşir.
• Treponemal olmayan reaksiyonlar, yok edilmiş treponemaların veya insan vücudunun hücrelerinin lipoproteinlerine karşı antikorları tespit eden reaksiyonlardır.

Önemli! İkincisi, hayvan dokularının lipoproteinlerinden çok farklı olmadığından, sifiliz analizinin sonucu yanlış pozitif olabilir. Yalnızca pozitif bir treponemal reaksiyon, hastalığın teşhisini kardinal olarak doğrulayabilir.

Frengi onaylıyor veya ekarte ediyoruz: tarih, semptomlar, testler

Sadece bir dermatovenerolog tanıyı doğrulayabilir veya dışlayabilir. Bir ürolog veya jinekolog, hastalıktan yalnızca dış belirtilerle şüphelenebilir. Daha sonra ileri tetkik, tedavi ve gözlem için hastayı bir dermatovenereoloğa sevk etmelidirler.

"Frengi" teşhisi, aşağıdaki belirtilerin bir kombinasyonuna dayanır:

1. Dış belirtilerin ve semptomların varlığında veya yokluğunda.
2. En az iki sonuç üzerine laboratuvar araştırması: treponemal olmayan (RMP veya RW veya RPR) ve treponemal (RPHA veya ELISA) testler.
3. Daha önce sifiliz olup olmadığına ve daha önce tedavi edilip edilmediğine dair veriler hakkında.

Semptomlar mevcutsa

Frengi için ana testler - RPR ve RPHA

• En bariz ve makul tanı, var olduğunda kabul edilir. klinik semptomlar ve iki analizin sonuçlarının doğrulanması: RPR (veya RW, RMP) ve RPGA (veya ELISA).
• Semptomların varlığında test sonuçları farklıysa ve RPR negatifse ve TPHA (veya ELISA) pozitifse, ek bir treponemal test yapılır - ELISA (veya önce ELISA yapıldıysa RPHA). Ek tahlilin pozitif çıkması durumunda teşhis kesinleşmiş kabul edilerek tedavi gerçekleştirilir, negatif çıkması durumunda uzman bir laboratuvara kan gönderilir.
  Pozitif ELISA/TPHA ile negatif RPR genellikle geç dönemde ortaya çıkar. Daha sonra beyin omurilik sıvısı (RIF-c, RIT) mutlaka enfeksiyon varlığı açısından incelenir.
• Tersi durum, RPR pozitif ve TPHA negatif (veya şüpheli) olduğunda, oldukça nadirdir. Bu, sert bir şansın ortaya çıkmasından sonraki ilk 3-4 haftada ve ayrıca bağışıklık "prozon" (aşırı miktarda antikor) sırasında ikincil dönemde mümkündür. Bu durumda, analizin tekrarlanması önerilir.

Dış belirtiler yoksa

O zaman teşhis zorlaşır. Burada doktorlar yalnızca devam eden veya daha önce tedavi edilmemiş tedaviler hakkındaki testlere ve bilgilere güvenir.

Bu durumda seçenekler:

• Treponemal olmayan (RMP / RW / RPR'den biri) ve treponemal test (RPHA / ELISA) pozitif ise, ek bir alternatif treponemal test yapılır (ilk test RPHA ise ELISA ve tersi - ELISA varsa RPHA) ). Test negatif çıkarsa hastanın kanı uzman bir laboratuvara gönderilerek ek testler yapılır. İkinci treponemal test pozitif çıkarsa "gizli frengi" teşhisi konulur.Bu durum tedaviden sonra bir süre daha devam edebilir. Hasta daha önce tedavi edilmişse, tanıyı doğrulamak için I gM ile ilgili ek bir çalışma yapılır. Sonuçlar pozitif çıkarsa tanı kesinleşir ancak yine de 2 hafta sonra çalışmanın tekrarlanması önerilir. Sonuçlar negatif ise frengi çürütülür.
• Non-treponemal test (RMP/RW/RPR) negatif, treponemal test (RPHA/ELISA) pozitif ise durum “geç sifiliz” veya hastada daha önce sifiliz var ise “sifiliz yok” şeklinde değerlendirilebilir. tam tedavi gördü. Bu iki durumu ayırt etmek için, I gM için ek bir test gerçekleştirilir (ELISA I gM, RIF-abs-I gM, Immunoblotting-I gM). Kanda I gM varsa, "geç sifiliz" koyun ve tedavi edin. Değilse, hasta sağlıklı kabul edilir.
• RPR (veya RW / RMP) pozitif, RPHA pozitif ve ELISA negatif (veya tersi: RPHA "-" ve ELISA "+") ise, test sonuçları şüphelidir ve kan gönderilmesi önerilir. uzman bir laboratuvara gönderin veya alternatif testler yapın (RIF, immünoblotlama).
• Treponemal olmayan test (PMP / RW / RPR) pozitif ve treponemal test (RPHA / ELISA) negatif ise, ek bir treponemal test (ELISA / RPHA) yapılır. Pozitif sonuç verirse kan uzman bir laboratuvara gönderilir. Negatif ise tanı reddedilir ve treponemal olmayan testin sonucu yanlış pozitif olarak kabul edilir.

Laboratuvar teşhis yöntemlerinin sınıflandırılması

Serolojik tanı, doktorun sifilizli bir hastanın vücudunda antikor oluşumunun dinamiklerini incelemesine yardımcı olur. Ilk aşamalar hastalık, tedavi süresi boyunca ve tamamlandıktan sonra, bir hastada hastalığın tekrarlaması veya yeniden enfeksiyon (reenfeksiyon) sorununu çözmek, toplu tıbbi koşullar altında sifiliz teşhisi koymak.

Soluk treponema IgM'ye karşı antikorlar

IgM antikorları enfeksiyondan sonra ilk üretilen antikorlardır. Enfeksiyondan sonraki ikinci haftadan itibaren serolojik reaksiyonlar kullanılarak tespit edilmeye başlanır.

6-9 haftalık hastalıkta sayıları maksimum olur. Hasta tedavi edilmemişse, antikorlar altı ay sonra kaybolur.

IgM antikorları 1-2 ay sonra kaybolur. erken sifiliz tedavisinden sonra, 3-6 ay sonra.

Geç sifiliz tedavisinden sonra. Büyümeleri kaydedilirse, bu, sifilizin nüksetmesinin bir işaretidir veya yeniden enfeksiyonu gösterir.

IgM molekülleri büyüktür ve plasentadan fetüse geçmezler.

Soluk treponema IgG'ye karşı antikorlar

Antikorlar immünoglobulinler IgG enfeksiyon anından itibaren birinci ayın sonunda (4. haftada) ortaya çıkar. Titreleri IgM titresinden daha yüksektir. IgG, tedaviden sonra oldukça uzun bir süre devam eder.

Spesifik olmayan antikorlar

Birçok serolojik reaksiyon vardır. Bu, soluk treponemanın antijenik çokluğundan kaynaklanmaktadır.

Sifilizin farklı aşamalarındaki hasta bir kişinin kan serumunda, spesifik olanlara ek olarak, belirli spesifik olmayan antikorlar oluşur - aglütininler, tamamlayıcı fiksasyon, immobilisinler, immün floresana neden olan antikorlar, çökeltiler, vb.

Spesifik olmayan antikorların tespiti için serolojik testlerin göreceli özgüllüğü vardır, bu nedenle, teşhis hatalarından kaçınmak için, bir değil, bir serolojik test kompleksi (CSR) kullanılmalıdır.

Frengi için yanlış pozitif testler

İnsan kanında kardiyolipin antijenine karşı üretilen reaktif antikorlar sadece sifilizde değil, diğer hastalıklarda da kayıtlıdır: kollajenoz, hepatit, böbrek hastalığı, tirotoksikoz, kanser, bulaşıcı hastalıklar (cüzzam, tüberküloz, bruselloz, sıtma, tifüs) ), kızıl), hamilelik ve adet sırasında, yağlı yiyecekler ve alkol alırken.

İmmünolojik kompleksler gibi biyolojik olarak aktif maddelerin içeriğinin seviyesini belirlemek için özel bir laboratuvar çalışması gereklidir. Hematolojik, bulaşıcı veya otoimmün bir hastalıktan şüpheleniliyorsa, uzmanlar ELISA için bir kan testi reçete eder. Makale boyunca ne olduğunu, buna nasıl hazırlanılacağını, neyi gösterdiğini ve kendiniz nasıl deşifre edeceğinizi ele alacağız.

Bu ne tür bir çalışma - ELISA için bir kan testi? Kısaltma, çeşitli biyolojik olarak aktif maddelerin kantitatif ve kalitatif içeriğinin yanı sıra biyolojik materyaldeki antikorlar ve antijenleri belirleyen enzim immünolojik testi anlamına gelir.

Enzim immunoassay'de kullanılanlar:

• Beyin omurilik sıvısı;
• üretra mukusu, servikal kanal;
• amniyotik sıvı;
• içerik vitröz vücut.

Enzim immunoassay, cinsel yolla bulaşan hastalıkları, bulaşıcı ve onkolojik süreçleri teşhis etmek için reçete edilir, alerjik reaksiyonlar, endokrin ve üreme sistemlerinin çalışma bozuklukları, otoimmün ve immün yetmezlik hastalıklarının yanı sıra bazı böbreklerin gelişme riskini değerlendirmek için.

Hamilelik sırasında ELISA için bir kan testi, erken teşhis, ilk aşamalardaki gelişimsel bozukluklar ve dinamiklerinin kontrolü amacıyla reçete edilir. Ek olarak, ELISA analizi, bir çocukta ciddi nörolojik bozuklukların gelişmesine neden olabilecek antikorların seviyesini kontrol etmenize olanak tanır, böylece sadece hamilelik sırasında değil, doğum sırasında da komplikasyonların gelişmesini önler.

Tespit edilen sorunlara önceden müdahale etmeyi ve hem annenin hem de bebeğinin sağlığını önemli ölçüde iyileştirmeyi mümkün kılar.

Kan ELISA'nın faydaları şunları içerir:

• yüksek (%90'a kadar) hassasiyet derecesi;
• hastalığın evresinin eşzamanlı olarak belirlenmesi ile erken tanı olasılığı;
• düşük reaktif maliyeti ve sonuç olarak bulunabilirlik;
• araştırma için minimum malzeme miktarı;
• asgari makbuz koşulları;
• reaktiflerin uzun süreli saklanması olasılığı;
• patolojik sürecin gelişim dinamiklerini kontrol etme yeteneği.

test sistemleri

Enzim immunoassay'in eksileri:

• hastalığa neden olan ajanı belirlemek imkansızdır, laboratuvarda sadece ona karşı bir bağışıklık tepkisi alırlar.
• yanlış sonuç alma olasılığı (çok nadir durumlarda, özellikle gebelik döneminde).

Hazırlık

Bu tür kan testinin prensibi, insan vücuduna antijenler, yani belirli bir hastalığın gelişmesine neden olan yabancı maddeler girdiğinde spesifik antikorların oluşumuna dayanır. Etkileşimlerinin bir sonucu olarak, enzim immün testinin uygulanmasında araştırmaya konu olan “antijen-antikor” kompleksleri oluşur.

Bu bağlamda, bu kompleksleri etkilememek ve buna bağlı olarak elde edilen sonuçların güvenilirliği için, ELISA için bir kan testi ve diğer biyolojik materyaller biraz hazırlık gerektirir.

Ayrıca, önerilen muayeneden 14 gün önce, spesifik tedavi askıya alınır ve antibakteriyel, antiviral kullanımı ilaçlar durur.

ELISA için kan damardan alınır. Kan örneklemesinden hemen önce, limit fiziksel egzersiz ve sigara içmekten ve alkol almaktan kaçının.

Enzim immün testinin yürütülmesi için çeşitli teknikler ve yöntemler vardır: doğrudan ve dolaylı yöntem, rekabetçi ve bloke edici yöntem.

ELISA'da kanın (diğer herhangi bir biyolojik materyal) incelenmesinin temeli, bağışıklık ve enzimatik olmak üzere iki reaksiyonun uygulanmasından oluşan bir algoritmadır.

İlki sırasında patolojik ajanlar, çalışma için alınan biyolojik materyalin hücrelerinin koruyucu elemanlarına bağlanır. Bir antijen-antikor bağışıklık kompleksi oluşur. Bu gibi görünüyor. Antijenler kesinlikle tüm hücrelerin yüzeyinde bulunur.

Yabancı hücreler vücuda girdiğinde, yeni gelen hücrelerin yüzeyinden antijen verilerini kendi "hafızalarında" depolanan bilgilerle karşılaştıran bağışıklık hücreleri (yüzeylerinde antikorların bulunduğu) tarafından yakalanırlar. Bu veriler arasında tutarsızlık olması durumunda, bir bağışıklık kompleksi oluşumundan oluşan vücudun koruyucu işlevleri dahil edilir.

Bundan sonra, önceki reaksiyonun sonuçlarını görselleştiren enzimatik bir reaksiyon gerçekleştirilir. İlkesi, maddenin birinden diğerine dönüşmesine dayanır. Malzemenin bağışıklık reaksiyonu sırasında oluşan her bir ELISA türü için, işlenmesi yabancı bir maddenin konsantrasyonunu (çözelti boyama yoğunluğu ile) belirlemek için kullanılan belirli bir enzim vardır.

şifre çözme

ELISA için bir kan testi sayesinde, laboratuvar asistanları A, G ve M'yi belirler. ELISA için kan (diğer biyolojik hammaddeler) çalışmasında pozitif bir sonuç, yalnızca tanı koymayı değil, aynı zamanda hastalığın evresini de mümkün kılar. , ayrıca seyrinin doğası (akut veya kronik).

Hastanın vücudunda patolojik bir sürecin varlığında bu immünoglobulinler, hastalığın farklı dönemlerinde oluşur:

• İmmünoglobulinler M, IgM- hastalığın başlangıcından beş gün sonra oluşurlar ve 1,5 ay kanda kalırlar, ardından kaybolurlar. IgM'nin saptanması, vücutta akut bir birincil patolojik sürecin varlığını ve gelişmiş terapötik müdahale ihtiyacını gösterir.
• İmmünoglobulinler G, IgG- enfeksiyondan dört hafta sonra ortaya çıkarlar, vücuttaki varlıkları birkaç ay boyunca tespit edilebilir. IgG'nin saptanması, kişinin anamnezinde geçmiş bir hastalığının varlığını gösterir. İçeriğindeki bir artış, yeniden enfeksiyonu da gösterebilir.
• İmmünoglobulinler A, IgA- enfeksiyon anında ortaya çıkar ve vücutta dört hafta kalır. İçeriğinde bir azalma, iyileşmenin başladığını gösterir. Kişinin bir tedavi süreci geçirip sağlığına kavuştuktan sonra tekrar tahlillerde görünmesi, hastalığın hastalığa geçişine işaret ediyor. kronik form. ELISA sonuçlarında IgA ve IgG'nin eşzamanlı tespiti ayrıca vücutta kronik bir sürecin varlığını gösterir.

Şunu da belirtmek gerekir ki, eş zamanlı mevcudiyet IgG tahlilleri ve IgM, kronik sürecin kötüleştiğini ve hastanın tedaviye başlaması gerektiğini gösterir. Muayene sırasında immünoglobulinlerden hiçbiri saptanmadıysa, bu bir bağışıklık tepkisinin olmadığı anlamına gelir.

Mevcut teşhis yöntemlerinin listesi son yıllarda hızla genişlemektedir, teşhis uzmanları önceki tüm analizlerin avantajlarını yeni yöntemlerde birleştirerek önceki tüm eksikliklerinden kurtulmaya çalışmaktadır.

Son zamanlarda, teşhis prosedürleri listesinde giderek daha sık olarak, enzim immün testi ortaya çıkıyor - tıpla ilgili olmayan sıradan bir kişi tarafından çok az bilinen modern ve oldukça yeni bir test. Bununla birlikte, bu teknik, nitelikli tıbbi personel arasında taraftarlarının saflarını hızla yeniliyor. Nedir ve hangi durumlarda kullanılması gerekir, özelliklerini ve ana özelliklerini öğrenerek anlamaya çalışabilirsiniz.

Enzim immunoassay, antijen-antikor moleküler reaksiyonuna dayanan, biyolojik materyallerdeki (araştırma için numuneler) spesifik proteinlerin saptanmasını mümkün kılan enstrümantal bir laboratuvar tekniğidir. Bu tür proteinler enzimler, çeşitli mikroorganizmalar (virüsler, bakteriler, mantarlar), protozoalar vb. olabilir.

Yöntemin keşfinden sonra, keşfedenlerin adıyla ilgili olmayan, ancak İngilizce versiyonundaki tam adın kısaltması olan ELISA testi adı verildi - enzime bağlı immünosorbent testi. Dünyanın her yerindeki doktorlar bu adı kullanıyor, Rusça konuşulan ülkelerdeki bazı doktorlar da bu tür bir çalışma diyorlar.

Yöntemin ana prensibi, "antijen-antikor" moleküler reaksiyonudur.

Bir antijen, patojenik bir mikrobun parçası olarak insan vücuduna giren herhangi bir yabancı moleküldür. Antijenler genellikle protein molekülleridir. Mikroorganizmalara ek olarak, böyle bir "yabancı", bir başkasının kanının grup veya Rh faktörü bakımından eşleşmeyen hücreleri olabilir.

Vücuda böyle bir antijenin girmesine yanıt olarak, herhangi bir yabancı moleküle karşı korumayı amaçlayan bir bağışıklık reaksiyonu başlatılır. Bu, özel ajanların sentezi nedeniyle olur. bağışıklık sistemi- antikorlar (immünoglobulinler). Her antikor yalnızca belirli bir antijene yaklaşır ve patojenik "yabancıyı" tek bir kompleks halinde bağlayarak nötralize eder. Antijen-antikor reaksiyonu olarak adlandırılan bu tür bir bağlanma işlemidir.

antikor türleri

Tüm antikorlar (immünoglobulinler), bağışıklık tepkisinin hangi aşamasında göründüklerine bağlı olarak 5 türe ayrılır:

ELISA teşhisi için, immünoglobulinler IgG, IgM ve IgA'nın seviyeleri çoğunlukla önemlidir. Kredilerinden, bir kişinin daha önce bir hastalık geçirip geçirmediğini veya yakın zamanda enfekte olup olmadığını, bağışıklık geliştirip geliştirmediğini veya vücudunun patolojiye karşı savunmasız olup olmadığını öğrenebilirsiniz.

Enzim immunoassay'in avantajları ve dezavantajları

Şu anda ELISA en doğru ve hassas yöntemlerden biridir. Tıbbın çeşitli alanlarındaki uzmanlar tarafından benimsenmiş ve kapsamını genişletmeye devam etmektedir.

yöntemin avantajları

• Alınan verilerin yüksek doğruluğu.
• Hassasiyet (numunede minimum patojen varlığı olsa bile gerekli maddeyi tespit etmenizi sağlar).
• Hastalığın ilk günlerinde veya kuluçka döneminde teşhis imkanı.
• Benzer doğruluktaki diğer yöntemlerle karşılaştırıldığında veri toplama hızı.
• Sürecin yüksek otomasyonu ve icracının hatasını azaltan minimum insan katılımı.
• Patolojik sürecin aşaması ve seçilen tedavinin etkinliği hakkında veri elde etmek.
• Malzeme seçiminde ağrısız ve düşük invazivlik.

yöntemin dezavantajları

• Çoğu durumda, patojenin kendisini değil, vücudun patojenik bir maddeye tepkisini belirlemenize izin verir.
• Çalışmadan önce, test oldukça spesifik olduğundan şüphelenilen hastalık kesin olarak bilinmelidir.
• Teknik sorunlardan kaynaklanan yanlış göstergelerin olasılığı, alım ilaçlar, hastanın vücudunda birkaç kronik hastalığın veya metabolik bozukluğun eşzamanlı varlığı.
• Sonuçların yorumlanması yalnızca kalifiye bir uzman tarafından yapılmalıdır, çünkü elde edilen verileri yorumlamak için belirli bir alanda özel eğitim ve geniş bir tıbbi bilgi birikimine sahip olmak gerekir.
• ELISA oldukça nadir bir analizdir, bu nedenle tüm teşhis laboratuvarlarında yapılmaz.
• Yöntem oldukça pahalıdır, çünkü reaktiflere ek olarak, laboratuvarın çok sayıda pahalı ekipmanı ve özel enstitülerde üretilen antijen örnekleri olması gerekir.

Enzim immunoassay ne zaman kullanılır?

Enzim immün testinin atanması için endikasyonların tam listesi çok geniştir, neredeyse tüm tıp dallarını içerir.

Çoğu zaman, ELISA bu tür amaçlar için kullanılır:

• tespit etme bulaşıcı hastalıklar;
• zührevi hastalıkların teşhisi;
• bağışıklık durumunun veya bireysel otoimmün hastalıkların belirlenmesi;
• tümör belirteçlerinin tanımlanması;
• hormonların tanımı.

Enfeksiyon durumunda ve viral hastalıklar Teknik, aşağıdaki patolojileri tanımlamanıza izin verir:

Ayrıca ELISA, kalp krizini hızlı ve etkili bir şekilde belirlemenize, vücudun üreme potansiyelini değerlendirmenize, alerjileri, kaynağını vb. belirlemenize olanak tanır.

ELISA tekniği, yeni ilaçların geliştirilmesinde ve insan vücudu üzerindeki etkilerinin değerlendirilmesinde klinik deneyler yapmak için kullanılır.

Örneklem türleri ve araştırma için seçilme yöntemleri

Çoğu zaman, enzim immunoassay için test materyali, hastanın kübital damarından alınan kandır. Örnekleme, özellikle sabahları aç karnına yapılır. Kandan seçimden sonra, çalışmaya müdahale eden oluşan hücreler ayrılır ve çıkarılır, geriye sadece serum kalır.

Genitoüriner enfeksiyonları teşhis ederken, genital organların mukoza dokularından bulaşmalar, üretra veya serviksten mukus, rektumdan örnekler, kasık bölgesindeki ve vücudun diğer bölgelerindeki erozyon veya ülserlerden kazıma sıklıkla malzeme haline gelir. Ağız boşluğundan ve nazofarenksten smear alınabilir.

Bazen hamilelik sırasında amniyotik sıvının durumunu belirlemek için obstetrik ve jinekolojik uygulamada enzim immün testi kullanılır. Bu durumda amniyotik sıvı örnek olur. Bunun için uzun bir iğne ile fetal mesane delinerek az miktarda sıvı alınır. Tüm manipülasyonlar, olası riskleri en aza indirmek için steril bir aletle gerçekleştirilir.

Genellikle malzeme beyin omurilik veya seröz sıvı haline gelir. Bu, enjekte edilen lokal anestezi ile olur.

Enzim immunoassay için ne tür materyallerin gerekli olduğunu çalışmaya gönderen uzmanın belirtmesi gerekir. Genellikle numuneler aynı anda veya farklı yerlerden birkaç türden alınır. Bu tür bir muayene için sevki yapan doktor, hastaya biyomateryal teslimi için hazırlık hakkında da bilgi vermelidir.

Enzim immunoassay için hazırlık

Enzim immunoassay sonrası elde edilen verilerin doğruluğunu arttırmak için materyal seçimine yönelik hazırlık aşağıdaki gibi olmalıdır:

• Çalışmadan 10 gün önce, antibiyotikleri, antiviral ve antimikotik ilaçları hariç tutun;
• bir gün boyunca alkol, sigara ve uyuşturucu alımını dışlamak gerekir;
• aynı dönemde aşırı fiziksel efordan kaçınmak gerekir;
• reçeteyi yazan kişiye hastanın aldığı tüm ilaçlar hakkında bilgi verin;
• Hamileyseniz veya hamile olduğunuzdan şüpheleniliyorsa doktorunuza bildirin.

Test edilecek malzemelerin sabahları aç karnına seçilmesi en iyisidir.

Teşhis hormonal arka planın durumunu belirlemeyi amaçlıyorsa, arifede sakin bir durum sağlamak ve sinir gerginliğini önlemek önemlidir. Kadınlar için hormonlar için kan bağışı, randevu sırasında doktor tarafından görüşülecek olan aylık döngünün süresi ile açıkça belirlenir.

Örneklemeden 2-3 gün önce kızartılmış ve yağlı yiyecekler menüden çıkarılmalı, turunçgiller ve diğer turuncu ve sarı renkli meyve ve sebzeler hepatit testi öncesi yenmemelidir.

Enzim immunoassay sonuçlarının deşifre edilmesi

Niteliksel bir çalışmanın sonucu, kural olarak, "+" (bulundu) veya "-" (bulunamadı) işaretleriyle belirtilir.

Belirli immünoglobulin gruplarının varlığı veya yokluğu ile aşağıdaki sonuçlar çıkarılabilir:

• JgM (-), JgG (-), JgA (-) - hastalığa karşı bağışıklık tamamen yoktur (vücut daha önce bu tür antijenlerle karşılaşmamıştır);
• JgM (-), JgG (+), JgA (-) - daha önce bu antijenle veya bir aşıyla çarpışma vardı;
• JgM (+), JgG (-/+), JgA (-/+) - akut patolojik süreç (büyük olasılıkla birincil);
• JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) - kronik seyir;
• JgM (+), JgG (+), JgA (+) - nüks;
• JgM (-) - iyileşme aşaması.

Nicel değerler büyük bir bilgi yükü taşır, ancak bunları önceki endikasyonlara, hastanın yaşına ve her bir özel hastalık için normlara göre yalnızca ilgili hekim yorumlayabilir. Bu nedenle sonuçları tek başınıza değerlendirmeniz mümkün değildir.

Sonuçlar için ne kadar beklemek

Bu tekniğin, eldeki verileri elde etmek için hangi terimin belirlendiğine bağlı olarak birçok çeşidi vardır. ELISA teşhisinin ortalama süresi 4-6 saattir, bu da sonuçların hemen ertesi gün verilmesini mümkün kılar.

En uzun yöntemler, örneğin HIV enfeksiyonunun tespit edilmesi durumunda 10 güne kadar sürer.

Acil ihtiyaç halinde 1-2 saat içinde cevap alınan ekspres yöntemler kullanılabilir.

ELISA testini nereden alabilirim?

Bu tür teşhis için kullanılan ekipman oldukça pahalı olduğundan, tüm laboratuvarlar bunu satın alamaz. Ek olarak, belirli antijenleri içeren testlerin sınırlı bir raf ömrü vardır (genellikle yaklaşık 1 yıl), bu nedenle sürekli olarak güncellenmeleri gerekir.

Bu nedenlerle hükümet tıbbi kurumlar ELISA laboratuvarları her zaman mevcut değildir. Çoğu zaman, büyük özel tıbbi veya büyük teşhis merkezleriyle iletişime geçmeniz gerekir.

ELISA çalışması yapabilmek için laboratuvarın özel bir lisansa sahip olması, personel ve laboratuvar asistanlarının özel eğitimden geçmesi gerekir.

Çoğu zaman, hastayı muayene için yönlendiren doktor tarafından belirli bir teşhis merkezi veya laboratuvar önerilir.

Enzim immunoassay maliyeti

Bu çalışmanın fiyatı, ülkenin bulunduğu bölgeye ve hizmet veren kliniğin düzeyine bağlıdır. Moskova'da bir antijenin belirlenmesi için minimum fiyat 700 ruble'den başlıyor. Aynı anda birkaç immünoglobulini tanımlamak gerekirse, fiyat özetlenecektir.

Acil bir analiz durumunda, maliyet 150-200 ruble artar. her antijen için

Oldukça yüksek maliyetine rağmen, enzim immunoassay, hastanın muayenesini olabildiğince bilgilendirici ve hızlı hale getirmeyi mümkün kılar, bu da tedaviye başlamadan önceki süreyi azaltır ve kişinin durumunu hızlı bir şekilde stabilize etmenize olanak tanır.

Bu video "Enzim immunoassay'in temelleri" filmini göstermektedir.

Gelişim modern tıp Teşhis dünyasında, başarılarıyla şaşırtmaktan asla vazgeçmez ve artık doktorun yalnızca dolaylı işaretlere dayanarak olası bir teşhis hakkında varsayımlarda bulunmasına gerek yoktur. Enzime bağlı immünosorbent testinin (ELISA) laboratuvar çalışmaları dünyasının oluşturulması ve tanıtılması, yalnızca patojenin varlığını değil, aynı zamanda hastalığın diğer birçok özelliğini de hızlı ve doğru bir şekilde belirlemenizi sağlar.

IFA'nın oluşturulması ve geliştirilmesi tarihi

Bu kan testi yöntemi, pratik tıpta geçen yüzyılın ortalarında - 60'larda bir yerlerde kullanılmaya başlandı. İlk hedefi, biyolojik türlerin hücresel antijenik yapısının araştırılması ve incelenmesi ile sınırlı olan histoloji alanında bilimsel araştırma yapmaktı. Bir ELISA kan testi, bir enzim tarafından belirlenen bir "antijen-antikor" kompleksi oluşumu ile ilgili antijenlerin (AG) ve spesifik antikorların (AT) etkileşimine dayanır.

Bu fenomen bilim adamlarını, yöntemin bir patojen vücuda girdiğinde kan serumunda oluşan çeşitli sınıflardaki protein bileşiklerini tanımak için kullanılabileceğine karar vermeye sevk etti. Bağışıklık sisteminin işleyişine doğrudan dahil olmalarından dolayı, bu bileşiklere immünoglobulinler (IG, Ig) adı verildi ve keşif, laboratuvar teşhisinde en büyük buluş oldu.

Aynı zamanda, bu oldukça hassas yöntem, yalnızca 80'lerde aktif olarak kullanılmaya başlandı ve yalnızca son derece uzmanlaşmış tıbbi kurumlarda mevcuttu. İstasyonlar ve kan nakli merkezleri, zührevi ve bulaşıcı hastalıklar hastaneleri, enzim immunoassay analizörlerini kullanma fırsatına ilk sahip olanlardı. Bu, "20. yüzyılın vebası" - AIDS'in hızla yayılmasından kaynaklanıyordu ve acil tanı ve tedavi önlemleri gerekiyordu.

Tekniğin olasılıkları

ELISA kan testinin kapsamı oldukça geniştir - şu anda birçok hastalığın nedenlerini aramanın ne kadar zor olacağını hayal etmek imkansızdır. Böyle bir çalışma artık neredeyse tüm tıp dallarında hatta onkolojide kullanılmaktadır. Bilgisizlerin anlaması zor olsa da bazı durumlarda uygulandıktan sonra erken evrelerde tümör tespit edilerek hastaların hayatını kurtarmak mümkün olmuştur.

Önemli! ELISA, bazı malign süreçlerin belirteçlerini gösteren ve hastalığı başka hiçbir yönteme tabi olmadığı bir zaman diliminde tespit etmenizi sağlayan bir kan testidir.

Modern tanı merkezlerinde, laboratuvar testleri yalnızca tümör belirteçleri ile temsil edilmez - bu tanıyı gerçekleştirmek için etkileyici bir panel cephaneliği ile donatılmıştır. Bir küme tanımlamak için kullanılabilirler. patolojik durumlar hormonal anormallikler ve çeşitli kökenlerden bulaşıcı süreçler gibi.

Ek olarak, bir ELISA kan testinin yapılması ve deşifre edilmesi, etkinin izlenmesini mümkün kılacaktır. tıbbi müstahzarlar hasta bir kişinin ve hatta bir hayvanın vücudunda. İkincisi, veteriner kliniklerinde yaygın olarak kullanılmaktadır, evcil hayvanlarımızın veya geçimini sağlayanların sağlığını korumaya yardımcı olur, diyette vazgeçilmez olan istikrarlı bir et, süt ürünleri ve yumurta tedariki sağlar.

Böylece, sadece birkaç mililitre venöz kan almanın ve ELISA yöntemiyle teşhis etmenin bir sonucu olarak, araştırma materyallerini tanımlayan doktor şunları belirleyebilecektir:

• cinsiyet ve tiroid bezlerinin biyolojik olarak aktif maddeleri ve ayrıca böbreküstü bezleri dahil olmak üzere hormonal durum;
• bakteri varlığı ve viral enfeksiyon(hepatit B ve C, frengi, uçuk, klamidya, tüberküloz, miko- ve üreaplasmoz, HIV, TORCH) ve bu yapıdaki diğer hastalıklar;
• iyileşme ile sonuçlanan ve antikor oluşum aşamasına (bağışıklık tepkisi) geçen patolojik sürecin patojenlerinin hayati aktivitesinin belirtileri.

Bu tür komplekslerin bağışıklık hücreleri tarafından tanınması ve ortadan kaldırılması çok daha kolaydır. Birçok vakada antikor formundaki kalıntı etkiler, ömür boyu kanda tutulur ve bu da yeniden enfeksiyon riskini pratik olarak sıfıra indirir.

İmmünoglobulin çeşitleri

Birkaç antikor türü vardır ve bunların her biri, belirli bir aşamada bağışıklık tepkisi sürecine dahil olur. Örneğin, M sınıfı immünoglobulinler (IgM), vücutta antijen alımına yanıt olarak ilk oluşanlardır. En yüksek oranları hastalığın ilk günlerinde görülür.

ELISA'da kullanılan immünoglobulin türleri

Bağışıklık sistemi daha sonra antijenlerin tamamen yok edilmesinden ve hastanın iyileşmesinden sorumlu olan G sınıfı IG'leri (IgG) plazmaya gönderir. Daha sonra kanda bulunmaya devam ederek bağışıklık sistemini özdeş bir patojenin yeniden girişine hazırlar. Aşılama böyle çalışır. Patolojik mikroorganizmaların zayıflamış antijenlerinin girmesiyle, birçok immünoglobulin plazmada görünür ve dolaşımda kalır.

Laboratuar teşhisi için ilgi duyulan ana nesneler, Ig sınıfları M, G ve A'dır. Konsantrasyon seviyelerine göre, hastalığın evresini belirleyebilir ve bir kişinin hayatında hangi bulaşıcı hastalıklara sahip olduğunu öğrenebilirsiniz. Örneğin, geçmiş olup olmadığını kontrol edebilirsiniz. suçiçeği veya kızamıkçık. Hastanın vücudunda belirli bir AT veya AH tipinin bulunup bulunmadığını veya herhangi bir hormonun konsantrasyonunun bulunup bulunmadığını öğrenmek için, doktorun birden fazla laboratuvar testi yazmasına gerek yoktur - ELISA için bir sevk yazmak yeterlidir.

Tekniğin özü

Araştırma metodolojisi, her biri belirli amaçlar için tasarlanmış görevlerin çeşitli seçeneklerine (doğrudan ve dolaylı - rekabetçi ve rekabetçi olmayan) dayanmaktadır. Bu yaklaşım, hedeflenen bir arama yapmanızı ve mümkün olan en kısa sürede belirli bir patolojinin nedenini belirlemenizi sağlar. Farklı sınıf kategorilerindeki Ig'yi tespit etmek için 96 oyuklu bir plaka (polistiren panel) kullanılır ve oyuklarına adsorbe edilmiş rekombinant proteinler yerleştirilir. Antijenlerin rolünü oynarlar ve ilk aşamada katı fazdadırlar.

Kan plazması ile kuyuya girdiklerinde, antijenler veya antikorlar, yönelimleri ile bağlantılı olarak nesneyi tanımlar ve bir kompleks (AG - AT) oluşturur. Bu oluşum, daha sonra kuyunun değişmiş bir lekelenmesi olarak kendini gösteren bir enzim bileşiği (konjugat) ile sabitlenir. ELISA, özel laboratuvarlarda üretilen ve tam bir reaktif seti ile donatılmış özel test sistemlerinde üretilir.

Bu analiz yıkayıcılar ve okuma spektrometreleri üzerinde gerçekleştirilebilir, ancak bunlar el emeği gerektirir. Tabii ki, bir laboratuvar asistanının tüm manipülasyonları tam otomatik cihazlarda gerçekleştirmesi birkaç kat daha kolay ve daha hızlıdır. Bunları kullanırken, laboratuvar çalışanları büyük miktarda monoton aktiviteden kurtulur - yıkama, damlatma ve rutinin geri kalanı, ancak hepsi değil tıbbi kurumlar bu kadar pahalı ekipmanı karşılayabilir

Bu nedenle, birçok hastane ve teşhis kurumu ELISA'yı eski moda bir şekilde - yarı otomatik cihazlarda - gerçekleştirmeye devam ediyor.

Araştırma materyallerinin yorumlanması, yalnızca bir laboratuvar teşhis uzmanının yetkinliğidir - hastalığın seyrinin özellikleri ve incelikleri hakkındaki sonuçlar yalnızca ona söylenebilir. Bu durumda doktor mutlaka yanlış negatif veya yanlış pozitif cevaplar alma olasılığını dikkate almalıdır.

malzemelerin transkripsiyonu

Yüksek kaliteli enzim immün testinin sonucu, bu kan örneğinde istenen mikroorganizmanın bulunup bulunmadığı konusunda kesin bir sonuç olmalıdır. Kantitatif analiz, konsantrasyon seviyesini gösterir ve iki şekilde ifade edilebilir - sayılardaki değer veya "+" işaretlerinin sayısı.

Analiz edilen göstergeler

Araştırma sırasında, bağışıklık tepkisinde yer alan ana immünoglobülinlerin kapsamlı bir çalışması gerçekleştirilir, örneğin:

• IgM - bu sınıfın tespiti, bulaşıcı bir hastalığın akut formunun gelişmesi anlamına gelir. IgM arayışındaki olumsuz bir sonuç, hem istenen patojenin yokluğunun hem de hastalığın kronik bir seyire geçişinin kanıtı olabilir.
• IgA - çoğu durumda IgM yokluğunda bu sınıfın tanımı, kronik veya gizli biçim bulaşıcı bir hastalığın gelişimi.
• IgM ve IgA (eşzamanlı mevcudiyet) - her iki tip için pozitif sonuçlar, patolojinin akut formunun zirvesini gösterir.
• IgG - varlığı, hastalığın kronik bir forma dönüştüğünü veya iyileşmeyi ve belirlenmekte olan ajana karşı bağışıklık oluşumunu gösterir.

Belirli bir IG sınıfının görünümü ve birikimi, farklı zaman aşamalarında gerçekleşir. Örneğin, IgM ilk olarak, patojenin vücuda girmesinden yaklaşık 5 gün sonra ortaya çıkar. IG'ler yaklaşık 5-6 hafta kanda kalır ve sonra yavaş yavaş kaybolur. Şu anda, ELISA tarafından belirlenmeye hazırdırlar. Hastalığın başlangıcından yaklaşık 3-4 hafta sonra, daha sonra birkaç ay kalabilen IgG ortaya çıkar. Ancak analizde bunları tespit etmek her zaman mümkün değildir.

IgA kanda 2-4 hafta içinde oluşur ve %20'si serumda, %80'i ise mukoz membranların sekresyonunda bulunur. Kural olarak, bu immünoglobulinler, patojenin yok edildiğini ve hastanın iyileştiğini gösteren 2-9 hafta içinde kaybolur. ELISA hala IgA'nın varlığını gösteriyorsa, bu, sürecin kronik bir forma geçişini işaret eder.

Analiz sonuçları seçenekleri

Elde edilen verilere bağlı olarak, ELISA yanıtları, tüm AT ve AG'nin tam bir listesini ve pozitif veya negatif bir reaksiyonun bir göstergesini içeren bir tablo şeklinde form üzerinde verilebilir. Belirli durumlarda, nicel bir değer görüntülenecektir - keskin bir pozitif, pozitif, zayıf pozitif veya negatif sonuç. İkinci seçenek, çalışılan kan örneğinde bulunan antikor miktarını gösterir.

ELISA materyallerinin yorumlanmasının çeşitleri

Yukarıdaki değerlere ek olarak, ELISA sürecinde başka bir nicel parametre incelenir - yüzde olarak hesaplanan AT avidite indeksi. Hastalığın ne kadar sürdüğünü gösterir - yani, gösterge ne kadar yüksek olursa, patoloji o kadar fazla gelişir.

Alternatif ELISA yöntemi

Enzime bağlı immünosorbent testi oldukça iyi bilinen ve yaygın bir tanıdır. Belki bazıları bunu hiç duymamıştır, ancak geniş bir insan kitlesi tarafından daha da az bilinen bir çeşidi vardır. bu çalışma kan olmayan bir örneğin alındığı yer. Bu tekniğe dışkıda gizli kan testi denir ve çoğu durumda, buna eşlik eden ek zayıflatıcı prosedürlerden kaçınır. hoş olmayan duyumlar.

Gizli kan (hemoglobin molekülleri) için ELISA analizi, organ kanamasını tespit etmeyi mümkün kılar sindirim sistemi, önemsiz bile olsa, belirtileri hastanın dışkısında dedikleri gibi çıplak gözle bulunamaz. İnsan dışkısında gizli kanın ELISA analizi Kısa bir zaman gösterebilmek ülser, polipozis, divertiküloz, erken evrelerde belirli semptomların eşlik etmediği tümörler.

Bugüne kadar, çok sayıda patoloji listesinden AT ve AG'yi bulma yeteneği sağlayan binlerce çeşit enzim immunoassay teşhis test sistemi oluşturulmuştur. Bu nedenle, bu analiz hemen hemen tüm tıp dallarında, herhangi bir yaş kategorisi için kullanılmaktadır. Ve mutlak zararsızlık, hem hamilelik sırasında hem de zayıflamış hastaların teşhisi için başvurmanıza izin verir.

(ELISA), çeşitli hastalıklara karşı antikorlar olan özel hücrelerin aranmasına dayanan, laboratuvarda bir kan testi yöntemidir. Yöntem, yalnızca patojeni tanımlamaya değil, aynı zamanda patolojik sürecin hangi aşamada olduğunu belirlemeye de izin verir. İkincisi, hastanın prognozu ve ileri tedavisi için çok önemlidir.

Yöntemin avantajları ve dezavantajları

Hepsinin arasından modern yöntemler teşhis ELISA en yenilikçi ve teknik olarak doğrudur. Başlıca avantajları şunlardır:

1. Hastanın kanında bulaşıcı hastalıklara karşı mevcut tüm antikorları arama yeteneği.
2. Araştırma yönteminin yüksek kullanılabilirliği. Günümüzde ELISA analizleri orta ölçekli herhangi bir laboratuvar tarafından yapılabilmektedir.
3. Yöntemin neredeyse %100 özgüllüğü ve duyarlılığı.
4. Sayı karşılaştırması sayesinde antikorları ve antijenleri arama, patolojik sürecin aşamasını belirleme ve dinamiklerini izleme yeteneği.

Diğer testlere göre bu kadar çok avantaj, analizin tek dezavantajını tamamen gölgede bırakır: antikorları tespit edebilir, ancak patojenin kendisini tespit edemez.

Analizi değerlendirmek için temel terimler

ELISA analizinin ne olduğunu, ne olduğunu ve nasıl yapıldığını anlamak için uzmanların kullandığı temel terimlere aşina olmanız gerekir.

1. Antikor- insan bağışıklık sistemi hücreleri (tip B lenfositler) tarafından üretilen bir protein. Yabancı bir ajanın veya maddenin yutulmasına spesifik bir reaksiyonla yanıt verirler. Antikorların başka bir adı immünoglobulinlerdir, bunlar farklı sınıflara aittir: A, E, M, G. Kütle, tepki hızı, yarı ömür ve bir dizi başka özellik bakımından birbirlerinden farklıdırlar. Normal olarak, insan kanı esas olarak G sınıfı immünoglobulinler içerir.Herhangi bir enfeksiyon meydana gelirse, immünoglobulinler A ve M miktarı keskin bir şekilde artar.İmmünoglobulinler E, alerjik reaksiyonlarda yer alır.
2. Antijen- organik kökenli ve yüksek molekül ağırlıklı yabancı bir madde. Çoğu zaman patojenler veya biyolojik olarak aktif maddeleridir.
3. Antijen-antikor kompleksi veya immün kompleksi, doğrudan bir yabancı madde ve bir immünoglobulinin bir kombinasyonudur ve bu, bir immün tepkiye yol açar.

Yöntemin özü ve kapsamı

Hastaların sıklıkla aklına gelen bir soru vardır: ELISA analizi nedir, nasıl yapılır ve ne için yapılır? Aşamalarını kısaca anlatarak yöntemden anlaşılır bir şekilde bahsedebilirsiniz.

hazırlık aşaması. Laboratuvar doktoru 96 kuyucuklu özel bir plaka kullanıyor. Belirli bir patojenin antijeni, her bir kuyucuğun yüzeyine uygulanır.

1. Aşama Kan alınır ve daha sonra kuyuya damla damla uygulanır. Kuyu, kandaki antijen ve antikor arasında bir reaksiyon başlatır.

2. aşama Kuyuda, reaksiyon, bağışıklık komplekslerinin oluşumu ile tüm hızıyla devam eder. Sonuç olarak, belirli bir renkte bir madde oluşur. Renk yoğunluğu, hastanın kanında bulunan her spesifik patojene karşı antikor miktarına bağlıdır.

Sahne 3 Sonucun fotometri ile değerlendirilmesi. Bunun için spektrofotometre adı verilen özel bir cihaz kullanılır. Kuyudaki malzemenin yoğunluğunu ve kontrol örneğini karşılaştırır. Ayrıca, cihaz matematiksel analiz ile bir sonuç üretir.

Sonuçların değerlendirilmesi ve ELISA'nın amacı

Sonucun yorumlanması birkaç önemli nüansa bağlıdır:

1. Kuyunun optik yoğunluğu.
2. Kuyu plakası üreticisi (test sistemleri).
3. Araştırmanın yapıldığı laboratuvar.

Bu nüanslar göz önüne alındığında, farklı test sistemlerinden veya farklı laboratuvarlardan alınan iki sonucu asla karşılaştırmamalısınız.

ELISA analizini etkileyen bir diğer önemli nokta, antikorların sözde aviditesidir. Bu parametre, antijen miktarını, antijen-antikor kompleksindeki bağın gücünü karakterize eder. Tanımı, protein yapılarını çözmek için bağışıklık kompleksinin üre ile işlenmesine dayanmaktadır. Bu, antijen ve antikor arasındaki zayıf bağları yok etmenize ve yalnızca güçlü olanları bırakmanıza izin verir. Çalışmanın avidite için önemi, enfeksiyonun süresini bulmak için kullanılabilmesi gerçeğinde yatmaktadır. Bu bilgi hamile kadınlara tanı koymak için son derece önemlidir.

Bir ELISA kan testi şu amaçlara hizmet eder:

1. Çeşitli patojen antijenlerini aramak.
2. Hormonal arka planı incelemek.
3. Bir otoimmün hastalığın varlığını test etmek için.
4. İşaretçileri algılamak için onkolojik hastalıklar.

ELISA çeşitleri

ELISA analizi aşağıdaki çeşitlere sahiptir:

1. Dolaylı.
2. Dümdüz.
3. Rekabetçi.
4. engelleme yöntemi.

Ancak gerçekte günümüzde sadece ELISA (enzim bağlantılı immünosorbent testi) adı verilen bir yöntem kullanılmaktadır. Kuyu yüzeyinde bir renk değişikliği ile bir antijen-antikor kompleksi oluşumunun yukarıda açıklanan reaksiyonuna dayanır.

Doğrudan kantitatif ELISA kan testi özel ilgiyi hak ediyor. Bu bir analiz türü değil, sonuçları değerlendirmenin bir yolu. Onun sayesinde antikorların sayısı sayılır ve sınıfları belirlenir. Sonuç, numunenin optik yoğunluğuna, ELISA'nın gerçekleştirildiği test sistemine ve ayrıca laboratuvara bağlıdır.

ELISA ile tespit edilen hastalıklar

ELISA, çok sayıda farklı bulaşıcı hastalığı tanımlamanıza izin veren bir kan testidir. Ayrıca hem viral hem de bakteriyel hastalıklar. Örneğin, bağışıklık komplekslerinin oluşumu yardımıyla, aşağıdaki hastalıklara neden olan ajanların antijenlerinin varlığını kanıtlamak mümkündür:

Ayrıca ELISA şunları tespit etmenizi sağlar:

1. Kanser belirteçleri - TNF (tümör nekroz faktörü), PSA (prostata özgü antijen), CEA (kanser-embriyonik antijen), CA-125 (yumurtalık tümörü belirteci)
2. Hamilelik hormonu hCG'dir (insan koryonik gonadotropin).
3. Üreme sistemi bozuklukları: kadın ve erkek üreme sistemlerinin hormonları.
4. Tiroid bezinin patolojisi.

Bugün HIV için ELISA testinin bu tehlikeli hastalığı teşhis etmenin ana yolu olduğunu belirtmek önemlidir.

ELISA materyali ve örnekleme tekniği

ELISA yapmak için hastanın kanı aç karnına alınır. Ayrıca doğrudan analiz için kullanılan kandan serum elde edilir. Ek olarak ELISA da yapılabilir. Beyin omurilik sıvısı(beyin omurilik sıvısı), servikal kanalın mukusu (serviks), amniyotik sıvı ve hatta vitreus sıvısı (göz küresi).

Kan vermeden önce hasta herhangi bir ilaç kullanmaması gerektiği konusunda uyarılır, antibiyotik ve antiviral ilaçlar kan örneklemesinden en az iki hafta önce bitirilmesi önerilir.

Sonuçların alınması ve yorumlanması şartları

Laboratuvardan bir yanıt alma zamanlaması, çalışmalarının hızına değil, hastalığın aşamasına ve kanda halihazırda hangi antikorların ortaya çıktığına bağlıdır. Yani, örneğin: immünoglobulinler M, analiz için kan alındıktan yaklaşık 2 hafta sonra ortaya çıkar ve sürecin birincil enfeksiyon aşamasında olduğu veya kronik bir alevlenmenin meydana geldiği anlamına gelir. Aynı zamanda, birincil enfeksiyon sırasında M ve G sınıfı antikorlar ortaya çıkar. Üstelik ikincisi 4 hafta sonra tespit edilebilir.

IgA, 2-3 hafta sonra tek başına veya M ile birlikte ortaya çıkar, yani Akut enfeksiyon veya G ile birlikte, kronik bir süreci gösterir.

Antikorların kanda görünmesi için bu kadar farklı terimler hastayı sonuç için uzun süre bekletecektir. ELISA analizi yapıldıktan sonra bir aydan fazla beklemek kabul edilebilir. Doktor tarafından deşifre edilmesi ve yorumlanması da belli bir süre almaktadır.