डायरेक्ट कॉम्ब्स टेस्ट। नवजात शिशु के हेमोलिटिक रोग के निदान में कॉम्ब्स परीक्षण

डायरेक्ट कॉम्ब्स टेस्ट. इस टेस्ट की मदद से बच्चे के एरिथ्रोसाइट्स द्वारा तय किए गए ब्लॉकिंग एंटीबॉडीज की मौजूदगी साबित होती है। एक सकारात्मक प्रत्यक्ष परीक्षण संवेदीकरण को इंगित करता है और दूसरों के प्रकट होने से पहले ही नवजात शिशु के हेमोलिटिक रोग का एक मजबूत संकेत है। चिकत्सीय संकेत. एक अपवाद के रूप में, और केवल बहुत गंभीर मामलों में, संवेदीकृत एरिथ्रोसाइट्स के पहले से ही शुरुआत, लगभग पूर्ण हेमोलिसिस के कारण एक सीधा Coombs परीक्षण नकारात्मक हो सकता है।

प्रत्यक्ष Coombs परीक्षण निम्नानुसार किया जाता है: बच्चे की एड़ी से लिए गए रक्त की 5 बूंदों को एक परखनली में रखा जाता है और 5 मिलीलीटर खारा डाला जाता है। अच्छी तरह मिलाएं और 10 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज करें। एरिथ्रोसाइट तलछट से एक स्पष्ट तरल अलग किया जाता है। फिर फिर से 5 मिली सैलाइन डालें, मिलाएँ और सेंट्रीफ्यूज करें। खारा के साथ तीन बार मिलाने के बाद, एरिथ्रोसाइट्स अच्छी तरह से धोए जाते हैं। सतह पर तैरनेवाला के अंतिम पृथक्करण के बाद, 0.1 मिली की मात्रा में एरिथ्रोसाइट तलछट को 0.9 मिली खारा के साथ मिलाया जाता है। इस मिश्रण की 2-3 बूंदों को कांच की स्लाइड पर लगाएं और एक बूंद कॉम्ब्स सीरम की डालें। एग्लूटीनेशन की उपस्थिति इंगित करती है कि प्रतिक्रिया सकारात्मक है (सकारात्मक प्रत्यक्ष Coombs परीक्षण)। ठंडे एग्लूटीनिन की क्रिया से बचने के लिए अध्ययन 16 डिग्री सेल्सियस से ऊपर कमरे के तापमान पर किया जाना चाहिए।

अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षणमाँ के सीरम में मुक्त एंटीबॉडी की उपस्थिति के प्रमाण के रूप में कार्य करता है और माँ के सीरम के साथ किया जाता है।

आरएच असंगति वाले नवजात शिशु में हेमोलिटिक रोग आमतौर पर दूसरी गर्भावस्था के बाद प्रकट होता है। पहला बच्चा स्वस्थ पैदा होता है, दूसरा हल्के एनीमिया के लक्षणों के साथ पैदा होता है, और केवल तीसरी गर्भावस्था के बाद ही हेमोलिटिक बीमारी के स्पष्ट लक्षणों के साथ पैदा होते हैं। केवल पहली गर्भावस्था के दौरान पहले से संवेदनशील महिलाओं में हीमोलिटिक रोग के लक्षणों के साथ एक बच्चा पैदा हो सकता है। कुछ मामलों में, टीकाकरण गर्भपात और मृत जन्म का कारण बनता है। रोग की शुरुआत और गंभीरता के लिए, नाल की स्थिति और भ्रूण पर मातृ एग्लूटीनिन के संपर्क की अवधि महत्वपूर्ण है। जन्म से 10-14 सप्ताह पहले एग्लूटीनिन की उपस्थिति के साथ, बच्चे में आमतौर पर उपनैदानिक ​​रूप होते हैं। प्रसव से 15-26 सप्ताह पहले एग्लूटीनिन की शुरुआती उपस्थिति रोग के गंभीर रूप का कारण बनती है। रोग के सभी रूपों में, मुख्य प्रक्रिया हेमोलिसिस है। एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया का परिणाम हेमोलिसिस है, यकृत और मस्तिष्क केशिकाओं को नुकसान। किस घाव की प्रधानता के आधार पर भी हैं विभिन्न रूपबीमारी। कुछ एनाफिलेक्टिक घटनाएं भी खतरनाक होती हैं। वे हिस्टामाइन जैसे पदार्थों के निर्माण की ओर ले जाते हैं जो यकृत कोशिकाओं और विशेष रूप से बेसल नाभिक, अमोनियम हॉर्न, के नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं को गंभीर नुकसान पहुंचाते हैं। मज्जा पुंजताऔर यहां तक ​​कि सेरेब्रल कॉर्टेक्स भी। जिगर की कोशिकाओं को नुकसान के साथ, हेपाटल पीलिया को एक्स्ट्राहेपेटल पीलिया में जोड़ा जाता है। बच्चे परमाणु पीलिया के गंभीर लक्षणों के साथ मर जाते हैं। यदि वे जीवित रहते हैं, तो घावों के लक्षण बने रहते हैं। तंत्रिका तंत्र(कोरियोएथेटस आंदोलनों के साथ एक्स्ट्रामाइराइडल सिस्टम का उल्लंघन, एक प्रकार की डांसिंग गैट, सिर के मजबूर आंदोलनों, कभी-कभी लगातार गिरने के साथ स्वैच्छिक आंदोलनों के समन्वय में विकार, मांसपेशियों की टोन में वृद्धि, मानसिक मंदता, यानी तथाकथित संकेतों के साथ एन्सेफैलोपैथी पोस्टिक्टेरिया इन्फैंटम)।

एक प्लेट या कांच की स्लाइड पर पिपेट (अलग!) के साथ O (I), A (II), B (III) सीरम की 1 बड़ी बूंद लगाई जाती है। समय को ध्यान में रखते हुए, एक साफ कांच की छड़ या कांच की स्लाइड के एक साफ कोण के साथ, सीरम की बूंदों को रक्त की बूंदों के साथ जोड़ दिया जाता है। दृढ़ संकल्प 5 मिनट तक चलता है, प्लेट को हिलाता है, फिर बूंदों के प्रत्येक मिश्रण में खारा समाधान की 1 बूंद डाली जाती है और परिणामों का मूल्यांकन किया जाता है। सीरम 2 अलग-अलग सीरीज का हो तो बेहतर है। दोनों सीरम सीरीज के ब्लड ग्रुप के नतीजे मेल खाने चाहिए।

Isohemagglutination के परिणामों का मूल्यांकन:

isohemagglutination। एक सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, लाल रक्त कोशिकाओं के मिश्रण में छोटे लाल दाने दिखाई देते हैं। अनाज बड़े दानों में विलीन हो जाते हैं, और बाद वाले गुच्छे में। सीरम लगभग फीका पड़ा हुआ है;

एक नकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, मिश्रण 5 मिनट के लिए समान रूप से गुलाबी रंग का रहता है और कोई दाने नहीं मिलते हैं;

समूह O(I), A(II), B(III) के 3 सेरा के साथ काम करते समय, प्रतिक्रियाओं के 4 संयोजन संभव हैं:

1. यदि सभी 3 सेरा ने एक नकारात्मक प्रतिक्रिया दी, अर्थात मिश्रण समान रूप से गुलाबी रंग का है - यह O (I) रक्त प्रकार है;

   यदि केवल समूह A (II) के सीरम ने नकारात्मक प्रतिक्रिया दी, और सीरम O (I) और B (III) ने सकारात्मक प्रतिक्रिया दी, अर्थात, अनाज दिखाई दिया - यह A (II) रक्त समूह है;

   B(II) समूह के सीरम ने नकारात्मक प्रतिक्रिया दी, और O(I) और A(II) समूह के सीरम ने सकारात्मक प्रतिक्रिया दी - यह B(III) रक्त समूह है।

सभी 3 सेरा ने सकारात्मक प्रतिक्रियाएँ दीं - AB (IV) समूह का परीक्षित रक्त। इस मामले में, AB (IV) समूह के सीरम के साथ एक अध्ययन किया जाता है।

टिप्पणी!अध्ययन किए गए रक्त की बूंदें सीरम की बूंदों से 5-10 गुना छोटी होनी चाहिए।

Isohemagglutination त्रुटियां।

जहाँ यह होना चाहिए वहाँ समूहीकरण नहीं और जहाँ नहीं होना चाहिए वहाँ समूहन होना। यह कम सीरम टिटर प्लस खराब एरिथ्रोसाइट एग्लूटिनेशन के कारण हो सकता है।

एग्लूटिनेशन की उपस्थिति जहां यह नहीं होना चाहिए- यह स्यूडोएग्लुटिनेशन है, जब एरिथ्रोसाइट्स के ढेर "कॉइन कॉलम" बनाते हैं। प्लेट को हिलाने या सेलाइन डालने से ये नष्ट हो जाती हैं।

पैनग्लुटिनेशन, जब सीरम अपने स्वयं के रक्त समूह सहित सभी लाल रक्त कोशिकाओं को एक साथ चिपका देता है। 5वें मिनट तक समूहन के लक्षण गायब हो जाते हैं।

कमरे में कम हवा के तापमान (15 डिग्री सेल्सियस से नीचे) के कारण एरिथ्रोसाइट्स एक साथ चिपक जाने पर तथाकथित ठंडा पैनग्लुटिनेशन भी होता है।

इन सभी मामलों में, या तो बार-बार प्रतिक्रिया की जाती है, या मानक एरिथ्रोसाइट्स के अनुसार।

रक्त के आरएच-संबद्धता का निर्धारण

आरएच संबद्धता निर्धारित करने के लिए, यानी, लोगों के रक्त में आरएच प्रणाली के एंटीजन की उपस्थिति या अनुपस्थिति का पता लगाने के लिए, मानक एंटी-रीसस सेरा (अभिकर्मकों) का उपयोग किया जाता है, जो विशिष्टता में भिन्न होते हैं, अर्थात, एंटीबॉडी के संबंध में इस प्रणाली के विभिन्न एंटीजन। आरएच 0 (डी) एंटीजन को निर्धारित करने के लिए, एंटी-रीसस सीरम का उपयोग अक्सर 10% जिलेटिन समाधान के अतिरिक्त या 33% पॉलीग्लुसीन समाधान के साथ पहले से तैयार मानक एंटी-रीसस अभिकर्मक के साथ किया जाता है। अध्ययन के अधिक सटीक परिणाम प्राप्त करने के साथ-साथ अन्य सीरोलॉजिकल सिस्टम के एंटीजन का पता लगाने के लिए, Coombs परीक्षण का उपयोग किया जाता है (यह ट्रांसफ़्यूज़ किए गए रक्त की अनुकूलता निर्धारित करने में भी बहुत संवेदनशील है)। अध्ययन के लिए, देशी रक्त या किसी प्रकार के परिरक्षक के साथ तैयार किया जाता है। इस मामले में, रक्त को आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के दस गुना मात्रा के साथ परिरक्षक से धोया जाना चाहिए। आरएच-संबद्धता निर्धारित करते समय- आरएच 0 (डी) दो अलग-अलग श्रृंखला के सीरम या एंटी-रीसस अभिकर्मक के दो नमूनों का उपयोग किया जाना चाहिए और साथ ही आरएच-पॉजिटिव (आरएच +) और आरएच-नेगेटिव (आरएच -) से रक्त से प्राप्त मानक एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग करना चाहिए। ) व्यक्ति। अन्य आइसोएंटिजेन का निर्धारण करते समय, नियंत्रण एरिथ्रोसाइट्स का तदनुसार उपयोग किया जाना चाहिए, जिसमें एंटीजन होता है या नहीं होता है जिसके खिलाफ एंटीबॉडी मानक सीरम में निर्देशित होते हैं।

अधूरा ताप एग्लूटीनिन सबसे आम प्रकार का एंटीबॉडी है जो ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के विकास का कारण बन सकता है। ये एंटीबॉडी आईजीजी, शायद ही कभी - आईजीएम, आईजीए से संबंधित हैं।

कॉम्ब्स टेस्ट

कॉम्ब्स टेस्ट: एक परिचय। Coombs परीक्षण एक प्रयोगशाला निदान पद्धति है जो रक्तगुल्म प्रतिक्रिया पर आधारित है।

ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के निदान के लिए मुख्य विधि Coombs टेस्ट है। यह इम्युनोग्लोबुलिन (विशेष रूप से आईजीजी) या पूरक घटकों (विशेष रूप से सी 3) के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी की क्षमता पर आधारित है, जो आईजीजी या सी 3 के साथ लेपित एरिथ्रोसाइट्स को जोड़ता है।

एरिथ्रोसाइट्स के लिए IgG और C3b का बंधन ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया और ड्रग-प्रेरित इम्यून हेमोलिटिक एनीमिया में मनाया जाता है। डायरेक्ट कॉम्ब्स टेस्ट।प्रत्यक्ष Coombs परीक्षण का उपयोग लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर तय किए गए एंटीबॉडी या पूरक घटकों का पता लगाने के लिए किया जाता है। इसे निम्नानुसार किया जाता है:

मानव इम्युनोग्लोबुलिन (एंटीग्लोबुलिन सीरम) या पूरक (एंटीकोम्प्लिमेंट्री सीरम) के लिए एंटीबॉडी प्राप्त करने के लिए, जानवर को मानव सीरम, इम्युनोग्लोबुलिन या मानव पूरक के साथ प्रतिरक्षित किया जाता है। जानवर से प्राप्त सीरम को एंटीबॉडी से अन्य प्रोटीन में शुद्ध किया जाता है।

सीरम को पूरी तरह से हटाने के लिए रोगी के एरिथ्रोसाइट्स को खारा से धोया जाता है, जो इम्युनोग्लोबुलिन और पूरक के एंटीबॉडी को बेअसर करता है और एक गलत नकारात्मक परिणाम पैदा कर सकता है।

यदि एंटीबॉडी या पूरक घटक एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर तय किए जाते हैं, तो एंटीग्लोबुलिन या एंटीकोम्प्लिमेंटरी सीरम के अतिरिक्त एरिथ्रोसाइट्स के एग्लूटिनेशन का कारण बनता है।

निम्नलिखित मामलों में डायरेक्ट कॉम्ब्स टेस्ट का उपयोग किया जाता है:

ऑटोइम्यून हेमोलिसिस।

नवजात शिशु की हेमोलिटिक बीमारी।

ड्रग-प्रेरित प्रतिरक्षा हेमोलिटिक एनीमिया।

हेमोलिटिक आधान प्रतिक्रियाएं। अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण।अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण सीरम में एरिथ्रोसाइट्स के एंटीबॉडी का पता लगाता है। ऐसा करने के लिए, रोगी के सीरम को समूह 0 दाता एरिथ्रोसाइट्स के साथ उष्मायन किया जाता है, और फिर एक सीधा Coombs परीक्षण किया जाता है।

अप्रत्यक्ष Coombs परीक्षण का उपयोग निम्नलिखित मामलों में किया जाता है:

दाता और प्राप्तकर्ता के रक्त की व्यक्तिगत अनुकूलता का निर्धारण।

एलोएंटीबॉडी का पता लगाना, एंटीबॉडी सहित जो हेमोलिटिक ट्रांसफ्यूजन प्रतिक्रियाओं का कारण बनता है।

मेडिकल जेनेटिक्स और फोरेंसिक मेडिसिन में सरफेस एरिथ्रोसाइट एंटीजन का निर्धारण।

अस्थि मज्जा प्रत्यारोपण में समान जुड़वा बच्चों की पुष्टि।

जैविक परीक्षण करने के लिए, जितनी जल्दी हो सके रक्त चढ़ाया जाता है (अधिमानतः एक जेट में)। रक्त के 25 मिलीलीटर के आधान के बाद, सिस्टम की ट्यूब को क्लैंप से जकड़ दिया जाता है। फिर 3 मिनट के लिए विराम दिया जाता है, जिसके दौरान प्राप्तकर्ता की स्थिति की निगरानी की जाती है। जैविक नमूना स्थापित करने के लिए, 25 मिलीलीटर रक्त को तीन बार इंजेक्ट किया जाता है।परीक्षण के अंत में (3 मिनट के अंतराल पर 25 मिलीलीटर की आंशिक खुराक में पहले 75 मिलीलीटर रक्त के आधान के बाद), प्रणाली को आवश्यक आधान दर में समायोजित किया जाता है। जब रोगी को एक से अधिक शीशी रक्त चढ़ाया जाता है, तो नस से सुई को निकालना आवश्यक होता है। इस मामले में, सुई को उस शीशी की टेस्ट ट्यूब से निकाल दिया जाता है जिसमें रक्त समाप्त हो गया है और अगली शीशी में डाला जाता है। सिस्टम ट्यूब (रबर या प्लास्टिक) इस समय एक क्लैंप के साथ जकड़ी हुई है। यदि रक्त आधान के दौरान प्राप्तकर्ता को किसी अन्य दवा के अंतःशिरा प्रशासन की आवश्यकता होती है, तो यह सिस्टम की रबर ट्यूब को छेद कर किया जाता है। प्लास्टिक ट्यूब का पंचर अस्वीकार्य है, क्योंकि वे गिरते नहीं हैं। प्रत्येक रक्त आधान के बाद, रोगी की पहचान करने और समय पर समाप्त करने के लिए उसकी निगरानी की जानी चाहिए संभावित जटिलताओं, शामिल एलर्जी. रक्त आधान की समाप्ति के 2 घंटे बाद शरीर के तापमान को मापा जाना चाहिए। इसके माप में वृद्धि के साथ अगले 4 घंटों में हर घंटे दोहराया जाना चाहिए। पेशाब और मूत्र संरचना की निगरानी भी उतना ही महत्वपूर्ण है, जो जहरीले पोस्ट-ट्रांसफ्यूजन प्रतिक्रिया की उपस्थिति को स्थापित करना संभव बनाता है। रक्त आधान के बाद ओलिगुरिया और अनुरिया की शुरुआत, मूत्र में रक्त कोशिकाओं और प्रोटीन की उपस्थिति पोस्ट-ट्रांसफ्यूजन हेमोलिसिस के विकास का प्रत्यक्ष संकेत है।

एंटीग्लोबुलिन का सिद्धांत. एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर स्थित आंशिक-प्रकार के एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी और पूरक अणु (C) का पता लगाया जा सकता है - प्रत्यक्ष परीक्षण - मानव एंटीग्लोबुलिन (एंटीग्लोबुलिन सीरम) के एंटीबॉडी युक्त पशु सीरम के संपर्क में उनके समूहन द्वारा। सीरम में मुक्त अधूरे एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है - अप्रत्यक्ष परीक्षण - उन्हें मिश्रण पर लगाकर सामान्य एरिथ्रोसाइट्ससमूह 0, जिनमें से सभी एंटीजन ज्ञात आरएच प्रणाली से संबंधित हैं, आगे एंटीग्लोबुलिन सीरम के प्रभाव में समूहित होते हैं।

एंटीग्लोबुलिन Coombs परीक्षण के लिए सामग्री, अभिकर्मक: 10/100 एमएल ट्यूब; 1.2 मिलीलीटर के लिए स्नातक किए हुए पिपेट; पाश्चर पिपेट; तिपाई; विषय बिना पॉलिश किया हुआ चश्मा; 8.5 ‰ NaCl समाधान; एरिथ्रोसाइट्स। रोगी के एरिथ्रोसाइट्स, साथ ही समूह 0 से संबंधित, एंटीकोआगुलेंट पदार्थ (ईडीटीए समाधान) पर ताजा रक्त से प्राप्त किए जाएंगे।

समूह 0 एरिथ्रोसाइट्स का चयन इस प्रकार करें कि वे सामान्य व्यक्तियों से आते हैं और उनमें सभी शामिल होते हैं आरएच सिस्टम एंटीजन. उन्हें +4 डिग्री सेल्सियस पर ऑटोलॉगस प्लाज्मा में 7 दिनों तक संग्रहीत किया जा सकता है। समूह 0 एरिथ्रोसाइट्स की अनुपस्थिति में, एक ज्ञात एंटीजेनिक मोज़ेक, समूह 0 एरिथ्रोसाइट्स, आरएच पॉजिटिव और आरएच-नकारात्मक एरिथ्रोसाइट्स का मिश्रण इस्तेमाल किया जा सकता है।

सीरमरोगी को नए सिरे से चुना जाना चाहिए।

एंटीग्लोबुलिन सीरमसंस्थान द्वारा उत्पादित। डॉ. आई. केंटाक्यूज़िनो, 1 मिली युक्त ampoules में लियोफ़िलाइज़्ड रूप में उपलब्ध है। विघटन के बाद सीरम को -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहित किया जाना चाहिए।

Coombs एंटीग्लोबुलिन परीक्षण तकनीक:
ए) डायरेक्ट कॉम्ब्स टेस्ट: रोगी के एरिथ्रोसाइट्स को 8.5 ‰ NaCl समाधान के साथ 3 बार धोएं।
कई स्लाइडों पर एंटीग्लोबुलिन सीरम कमजोर पड़ने की एक बड़ी बूंद और उसके बगल में रोगी की एरिथ्रोसाइट तलछट की एक छोटी बूंद लागू करें; हलचल बूँदें कांच के कोने से। तैयार सामग्री को 5 मिनट के लिए टेबल पर छोड़ दें, फिर एग्लूटिनेट्स की उपस्थिति की जांच करें। यदि सकारात्मक है, तो अधिकतम समूहन अनुमापांक निर्धारित करें।

बी) अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण: समूह 0 के एरिथ्रोसाइट्स, आरएच-पॉजिटिव और आरएच-नेगेटिव, 8.5‰ NaCl समाधान के साथ 3 बार धोएं और सीरम की 8-10 बूंदों के प्रति एरिथ्रोसाइट्स की 2 बूंदों की दर से रोगी के सीरम को बेनकाब करें, फिर, 60 मिनट के लिए, 37 ° C के तापमान पर सेते हैं। उसके बाद, एरिथ्रोसाइट्स को फिर से तीन बार धोएं और सीधे Coombs परीक्षण के निर्देशों के अनुसार, उन पर एंटीग्लोबुलिन सीरम के साथ कार्य करें।

कब हम बात कर रहे हैं ठंडे सक्रिय एंटीबॉडी के बारे में 60 मिनट खर्च करने के लिए समूह 0 के एरिथ्रोसाइट्स का संवेदीकरण। + 4 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर।

टिप्पणी: 1) + 4 डिग्री सेल्सियस या कमरे के तापमान के तापमान पर एक या अधिक दिनों के लिए संग्रहीत एरिथ्रोसाइट्स पर सीधे Coombs परीक्षण न करें, क्योंकि अपूर्ण, शीत-सक्रिय एंटीबॉडी के निर्धारण के कारण परिणाम झूठे सकारात्मक हो सकते हैं। सामान्य सीरम। 2) गंभीर हाइपरप्रोटीनेमिया के मामलों में, एरिथ्रोसाइट्स को 4-5 बार धोएं और सल्फोसैलिसिलिक एसिड का उपयोग करके अंतिम वॉश लिक्विड में सीरम प्रोटीन की अनुपस्थिति की जांच करें।

एरिथ्रोसाइट तलछट में 2 μg IgG/mL का संभावित अवशेष हो सकता है एंटीग्लोबुलिन सीरम को बेअसर करें. एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर ग्लोबोलिन के प्रकार को स्पष्ट करने के लिए Coombs परीक्षण मोनोस्पेसिफिक एंटी-आईजीजी, -आईजीएम, -आईजीए -सी3 और -सी4 सेरा का उपयोग करके भी किया जा सकता है, उदाहरण के लिए, ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया से पीड़ित लोगों में।

एंटीबॉडीएरिथ्रोसाइट्स की सतह पर स्थित, स्थिर और मुक्त अवस्था दोनों में हो सकता है रक्त प्लाज़्मा. एंटीबॉडी की स्थिति के आधार पर, प्रत्यक्ष या अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स प्रतिक्रिया की जाती है। यदि यह विश्वास करने का कोई कारण है कि एंटीबॉडी लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर तय होती हैं, तो एक सीधा Coombs परीक्षण किया जाता है। इस मामले में, परीक्षण एक चरण में गुजरता है - जोड़ा जाता है एंटीग्लोबुलिन सीरम. यदि लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर अधूरे एंटीबॉडी मौजूद हैं, भागों का जुड़नाएरिथ्रोसाइट्स।

अप्रत्यक्ष प्रतिक्रिया

अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स प्रतिक्रिया 2 चरणों में आगे बढ़ती है। सबसे पहले, कृत्रिम रूप से लागू करना आवश्यक है संवेदीकरणएरिथ्रोसाइट्स। ऐसा करने के लिए, एरिथ्रोसाइट्स और अध्ययन के तहत रक्त सीरम को ऊष्मायन किया जाता है, जो एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर एंटीबॉडी के निर्धारण का कारण बनता है। उसके बाद, कॉम्ब्स परीक्षण का दूसरा चरण किया जाता है - एंटीग्लोबुलिन सीरम को जोड़ना।

शीघ्र प्रतिक्रिया - आरपी (लैट प्रिसिपिलो से अवक्षेपण तक) एक घुलनशील आणविक प्रतिजन के एक जटिल का गठन और वर्षा है, जिसमें एंटीबॉडी के रूप में मैलापन होता है, जिसे कहा जाता है तलछट. यह एंटीजन और एंटीबॉडी को समान मात्रा में मिलाकर बनता है, उनमें से एक की अधिकता प्रतिरक्षा परिसर के गठन के स्तर को कम करती है। जैल, पोषक तत्व मीडिया, आदि में परीक्षण ट्यूबों (रिंग वर्षा प्रतिक्रिया) में वर्षा प्रतिक्रिया डाली जाती है। अगर या agarose के अर्ध-तरल जेल में वर्षा प्रतिक्रिया की किस्मों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, के अनुसार डबल इम्यूनोडिफ्यूजन ऑक्टरलोनी, रेडियम इम्यूनोडिफ्यूजन, इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिसऔर आदि।

एचएलए टाइपिंग- मुख्य मानव हिस्टोकम्पैटिबिलिटी कॉम्प्लेक्स - एचएलए कॉम्प्लेक्स का अध्ययन। इस गठन में क्रोमोसोम 6 पर जीन का एक क्षेत्र शामिल है जो विभिन्न प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं में शामिल एचएलए एंटीजन को एनकोड करता है।

पर कार्य एचएलए टाइपिंगबहुत भिन्न हो सकते हैं - जैविक पहचान (HLA-प्रकार माता-पिता के जीन के साथ विरासत में मिला है), विभिन्न रोगों के लिए पूर्ववृत्ति का निर्धारण, अंग प्रत्यारोपण के लिए दाताओं का चयन - इस मामले में, दाता और प्राप्तकर्ता ऊतकों के HLA टाइपिंग के परिणामों की तुलना की जाती है। एचएलए टाइपिंग की मदद से, यह निर्धारित किया जाता है कि बांझपन के मामलों का निदान करने के लिए ऊतक अनुकूलता एंटीजन के संदर्भ में पति-पत्नी कितने समान या भिन्न हैं।

एचएलए टाइपिंग से पता चलता है एचएलए बहुरूपता विश्लेषणऔर दो तरीकों से किया जाता है - सीरोलॉजिकल और आणविक आनुवंशिक। एचएलए टाइपिंग की शास्त्रीय सीरोलॉजिकल विधि माइक्रोलिम्फोसाइटोटॉक्सिक टेस्ट पर आधारित है, जबकि आणविक विधि पीसीआर (पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन) का उपयोग करती है।

सीरम विज्ञानी एचएलए टाइपिंगपृथक सेल आबादी पर प्रदर्शन किया। प्रमुख हिस्टोकम्पैटिबिलिटी कॉम्प्लेक्स एंटीजन मुख्य रूप से लिम्फोसाइटों द्वारा ले जाए जाते हैं। इसलिए, टी लिम्फोसाइटों का निलंबन वर्ग I एंटीजन के मुख्य वाहक के रूप में उपयोग किया जाता है, और एचएलए वर्ग II एंटीजन के निर्धारण के लिए बी लिम्फोसाइटों का निलंबन होता है। वांछित कोशिका आबादी को पूरे रक्त से अलग करने के लिए या तो सेंट्रीफ्यूगेशन या इम्यूनोमैग्नेटिक जुदाई का उपयोग किया जाता है। ऐसा माना जाता है कि पहली विधि से गलत-सकारात्मक डेटा प्राप्त हो सकता है, क्योंकि इस मामले में कुछ कोशिकाएं मर जाती हैं। दूसरी विधि को अधिक विशिष्ट के रूप में पहचाना जाता है - जबकि 95% से अधिक कोशिकाएं व्यवहार्य रहती हैं।

लेकिन एक लिम्फोसाइटोटॉक्सिक परीक्षण के मंचन का आधार एचएलए टाइपिंगएक विशिष्ट सीरम है जिसमें HLA एंटीजन I और II वर्गों के विभिन्न एलील वैरिएंट के एंटीबॉडी होते हैं। सीरोलॉजिकल परीक्षण आपको यह जांच कर एचएलए प्रकार निर्धारित करने की अनुमति देता है कि कौन सा सीरा लिम्फोसाइटों के साथ प्रतिक्रिया करता है और कौन सा नहीं।

यदि कोशिकाओं और सीरम के बीच प्रतिक्रिया होती है, तो कोशिका की सतह पर एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनता है। पूरक युक्त समाधान जोड़ने के बाद, लसीका और कोशिका मृत्यु होती है। HLA टाइपिंग के सीरोलॉजिकल परीक्षण का मूल्यांकन सकारात्मक (लाल प्रतिदीप्ति) और नकारात्मक (हरी प्रतिदीप्ति) प्रतिक्रियाओं, या मृत कोशिकाओं के नाभिक को दागने के लिए चरण-विपरीत माइक्रोस्कोपी का आकलन करने के लिए प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके किया जाता है। एचएलए टाइपिंग का परिणाम प्रतिक्रिया वाले सीरा और एंटीजन के क्रॉस-रिएक्टिंग समूहों की विशिष्टता, साइटोटोक्सिसिटी प्रतिक्रिया की तीव्रता को ध्यान में रखते हुए प्राप्त किया जाता है।

सीरोलॉजिकल के नुकसान एचएलए टाइपिंगक्रॉस-रिएक्शन, कमजोर एंटीबॉडी संबंध या एचएलए एंटीजन की कम अभिव्यक्ति, कई एचएलए जीन में प्रोटीन उत्पादों की अनुपस्थिति की उपस्थिति है।

अधिक आधुनिक, आणविक तरीके एचएलए टाइपिंगपहले से ही मानकीकृत सिंथेटिक नमूनों का उपयोग किया जाता है, जो ल्यूकोसाइट्स की सतह पर एंटीजन के साथ प्रतिक्रिया नहीं करते हैं, लेकिन डीएनए के साथ और सीधे संकेत देते हैं कि नमूने में कौन से एंटीजन मौजूद हैं। आणविक तरीकों के लिए लाइव ल्यूकोसाइट्स की आवश्यकता नहीं होती है, किसी भी मानव कोशिका का अध्ययन किया जा सकता है, और रक्त के कुछ माइक्रोलिटर काम करने के लिए पर्याप्त हैं, या यह मौखिक श्लेष्मा से स्क्रैपिंग तक सीमित हो सकता है।

आणविक आनुवंशिक एचएलए टाइपिंगपीसीआर विधि का उपयोग करता है, जिसका पहला चरण शुद्ध जीनोमिक डीएनए (संपूर्ण रक्त, ल्यूकोसाइट निलंबन, ऊतकों से) प्राप्त करना है।

फिर डीएनए नमूना कॉपी किया जाता है - एक विशिष्ट एचएलए लोकस के लिए विशिष्ट प्राइमरों (लघु एकल-फंसे डीएनए) का उपयोग करके टेस्ट ट्यूब में प्रवर्धित किया जाता है। प्रत्येक प्राइमर जोड़ी के सिरों को एक विशेष एलील के अनुरूप अद्वितीय अनुक्रम के लिए सख्ती से पूरक होना चाहिए, अन्यथा कोई प्रवर्धन नहीं होता है।

पीसीआर के बाद, बार-बार नकल करने के दौरान, बड़ी संख्या में डीएनए के टुकड़े प्राप्त होते हैं, जिनका मूल्यांकन नेत्रहीन किया जा सकता है। ऐसा करने के लिए, प्रतिक्रिया मिश्रण इलेक्ट्रोलिसिस या संकरण के अधीन होते हैं, और यह निर्धारित किया जाता है कि किसी प्रोग्राम या तालिका का उपयोग करके एक विशिष्ट प्रवर्धन हुआ है या नहीं। एचएलए टाइपिंग का परिणाम जीन और युग्मक स्तरों पर एक व्यापक रिपोर्ट के रूप में प्रस्तुत किया जाता है। उपयोग किए गए नमूनों के मानकीकरण के कारण, आणविक एचएलए टाइपिंगअधिक सटीक सीरोलॉजिकल। इसके अलावा, यह अधिक जानकारी (अधिक नए डीएनए एलील) और बहुत कुछ प्रदान करता है उच्च स्तरइसका विवरण, क्योंकि यह आपको न केवल एंटीजन की पहचान करने की अनुमति देता है, बल्कि स्वयं एलील भी है, जो यह निर्धारित करता है कि सेल पर कौन सा एंटीजन मौजूद है।

प्रतिरक्षा लसीका प्रतिक्रिया।प्रतिक्रिया कोशिकाओं के साथ प्रतिरक्षा परिसरों को बनाने के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी की क्षमता पर आधारित है, जिसमें एरिथ्रोसाइट्स, बैक्टीरिया शामिल हैं, जो शास्त्रीय मार्ग और सेल लसीका के साथ पूरक प्रणाली की सक्रियता की ओर जाता है। प्रतिरक्षा लसीका प्रतिक्रियाओं में से, हेमोलिसिस प्रतिक्रिया का सबसे अधिक उपयोग किया जाता है और शायद ही कभी बैक्टीरियोलिसिस प्रतिक्रिया होती है (मुख्य रूप से हैजा और हैजा जैसी विब्रियोस के भेदभाव में)।

हेमोलिसिस प्रतिक्रिया।पूरक की उपस्थिति में एंटीबॉडी के साथ प्रतिक्रिया के प्रभाव में, एरिथ्रोसाइट्स का अशांत निलंबन हीमोग्लोबिन की रिहाई के कारण एक चमकदार लाल पारदर्शी तरल - "लाह रक्त" में बदल जाता है। पूरक निर्धारण (आरसीसी) की नैदानिक ​​प्रतिक्रिया की स्थापना करते समय, हेमोलिसिस प्रतिक्रिया को एक संकेतक के रूप में उपयोग किया जाता है: मुक्त पूरक की उपस्थिति या अनुपस्थिति (बाध्यकारी) का परीक्षण करने के लिए।

जेल में स्थानीय हेमोलिसिस प्रतिक्रिया(जर्न रिएक्शन) हेमोलिसिस रिएक्शन के वेरिएंट में से एक है। यह आपको एंटीबॉडी बनाने वाली कोशिकाओं की संख्या निर्धारित करने की अनुमति देता है। एंटीबॉडी स्रावित करने वाली कोशिकाओं की संख्या - हेमोलिसिन, हेमोलिसिस सजीले टुकड़े की संख्या से निर्धारित होती है जो एरिथ्रोसाइट्स युक्त अगर जेल में दिखाई देती है, अध्ययन किए गए लिम्फोइड ऊतक और पूरक का एक सेल निलंबन।

इम्यूनोफ्लोरेसेंस विधि

(आरआईएफ, इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया) - फ्लोरोक्रोम के साथ संयुग्मित एबी (एजी) का उपयोग करके विशिष्ट एजी (एबी) का पता लगाने के लिए एक विधि। इसमें उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता है। इसका उपयोग एक्सप्रेस डी-की संक्रमण के लिए किया जाता है। रोग (अनुसंधान सामग्री में प्रेरक एजेंट की पहचान), साथ ही साथ एंटीबॉडी और सतह रिसेप्टर्स और ल्यूकोसाइट्स (इम्यूनोफेनोटाइपिंग), और अन्य कोशिकाओं के मार्करों के निर्धारण के लिए। डायरेक्ट आई. एम.फ्लोरोक्रोम के साथ संयुग्मित विशिष्ट एंटीबॉडी युक्त पैथोलॉजिकल सामग्री या माइक्रोबियल टू-आरई-कोय से एक ऊतक अनुभाग या स्मीयर के प्रसंस्करण में शामिल हैं; दवा को अनबाउंड एंटीबॉडी को हटाने के लिए धोया जाता है और एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। सकारात्मक मामलों में, वस्तु की परिधि के आसपास एक चमकदार प्रतिरक्षा परिसर दिखाई देता है। गैर-विशिष्ट ल्यूमिनेसेंस को बाहर करने के लिए नियंत्रण आवश्यक है। पर अप्रत्यक्ष। उन्हें।पहले चरण में, एक ऊतक खंड या स्मीयर को गैर-फ्लोरोसेंट विशिष्ट एजेंट के साथ इलाज किया जाता है, दूसरे चरण में, उस जानवर के -ग्लोब्युलिन के खिलाफ ल्यूमिनसेंट एजेंट के साथ, जिसे पहले चरण में लागू किया गया था। एक सकारात्मक मामले में, एक चमकदार परिसर बनता है, जिसमें Ar, Am to it और Am विरुद्ध At (सैंडविच विधि) शामिल होता है। ल्यूमिनेसेंट माइक्रोस्कोप के अलावा, सेल फेनोटाइपिंग के दौरान आरआईएफ के लिए खाते में, लेजर सेल सॉर्टर .

फ़्लो साइटॉमेट्री- एक सेल, उसके ऑर्गेनेल और उसमें होने वाली प्रक्रियाओं के मापदंडों के ऑप्टिकल माप की एक विधि।

तकनीक में एक लेजर बीम से प्रकाश के प्रकीर्णन का पता लगाना शामिल है जब एक सेल एक तरल जेट में इसके माध्यम से गुजरता है, और प्रकाश फैलाव की डिग्री से सेल के आकार और संरचना का अंदाजा लगाया जा सकता है। इसके अलावा, विश्लेषण रासायनिक यौगिकों के प्रतिदीप्ति के स्तर को ध्यान में रखता है जो सेल (ऑटोफ्लोरेसेंस) बनाते हैं या प्रवाह साइटोमेट्री से पहले नमूने में पेश किए जाते हैं।

सेल निलंबन, जिसे पहले फ्लोरोसेंट मोनोक्लोनल एंटीबॉडी या फ्लोरोसेंट रंजक के साथ लेबल किया गया था, प्रवाह सेल से गुजरने वाली तरल धारा में प्रवेश करता है। स्थितियों को इस तरह से चुना जाता है कि कोशिकाएं तथाकथित के कारण एक के बाद एक पंक्तिबद्ध होती हैं। जेट में जेट का हाइड्रोडायनामिक फोकसिंग। जिस समय सेल लेजर बीम को पार करती है, डिटेक्टर रिकॉर्ड करते हैं:

छोटे कोणों पर प्रकाश का प्रकीर्णन (1° से 10° तक) (इस विशेषता का उपयोग कोशिकाओं के आकार को निर्धारित करने के लिए किया जाता है)।

90 ° के कोण पर प्रकाश का बिखरना (आपको नाभिक / साइटोप्लाज्म के अनुपात के साथ-साथ कोशिकाओं की विषमता और ग्रैन्युलैरिटी का न्याय करने की अनुमति देता है)।

कई प्रतिदीप्ति चैनलों में प्रतिदीप्ति तीव्रता (2 से 18-20 तक) - आपको सेल निलंबन आदि की उप-जनसंख्या संरचना निर्धारित करने की अनुमति देता है।

कई मौजूदा प्रतिजनों में से मेडिकल अभ्यास करनातीन प्रकार के रक्त एग्लूटीनोजेन्स को सबसे अधिक महत्व दिया जाता है। उनमें से एक आरएच कारक के प्रकट होने के लिए जिम्मेदार प्रकार है: यदि यह एरिथ्रोसाइट झिल्ली पर मौजूद है, तो आरएच + रक्त समूह का निदान किया जाता है, यदि यह अनुपस्थित है - आरएच-। यदि रचना आरएच नकारात्मक रक्तआरएच + एग्लूटीनोजेन के साथ एरिथ्रोसाइट्स प्रवेश करते हैं, शरीर एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को ट्रिगर करता है और इस एंटीजन के लिए एंटीबॉडी का उत्पादन करना शुरू कर देता है, जो रोग संबंधी स्थितियों का कारण बनता है।

संदर्भ! आरएच कारक कई दर्जन प्रतिजनों की एक जटिल बहुघटक प्रणाली है। इनमें से सबसे आम टाइप डी एग्लूटीनोजेन (85% मामले), साथ ही ई और सी हैं।

Coombs का परीक्षण केवल प्रत्यक्ष संकेतों की उपस्थिति में किया जाता है। कॉम्ब्स परीक्षण निर्धारित करने के कारणों की एक सामान्य सूची:

• गर्भावस्था की योजना और प्रबंधन (माता-पिता के पास अलग-अलग आरएच हैं);
• रक्त आधान के लिए दान और तैयारी (आरएच में बेमेल रक्त AB0 प्रणाली में बेमेल से कम हानिकारक नहीं है);
• नियोजित सर्जिकल हस्तक्षेप (रक्त आधान के साथ रक्त की कमी को फिर से भरने के मामले में);
• हेमोलिटिक रोगों का निदान

अधिक विशिष्ट संकेत किए जा रहे अध्ययन के प्रकार पर निर्भर करते हैं।

डायरेक्ट कॉम्ब्स टेस्ट

एक सीधा परीक्षण लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर एंटीबॉडी का पता लगाता है। मौजूदा के निदान के लिए यह आवश्यक है हेमोलिटिक पैथोलॉजी:

• ऑटोइम्यून (एरिथ्रोसाइट्स और हीमोग्लोबिन शरीर के अपने एंटीबॉडी के हमले के परिणामस्वरूप नष्ट हो जाते हैं);
• दवा (पैथोलॉजिकल प्रक्रिया कुछ के सेवन को ट्रिगर करती है दवाइयाँक्विनिडाइन या प्रोकैनामाइड प्रकार);
• आधान के बाद (आधान के दौरान रक्त के प्रकार के बेमेल के साथ), साथ ही गर्भावस्था के दौरान आरएच संघर्ष के रूप में (नवजात शिशुओं के एरिथ्रोब्लास्टोसिस)।

संदर्भ! हेमोलिटिक एनीमिया हेमोलिसिस के परिणामस्वरूप लाल रक्त कोशिकाओं के समय से पहले विनाश से जुड़ी बीमारी है, जो अपर्याप्त रक्त ऑक्सीजन संतृप्ति और मस्तिष्क और / या आंतरिक अंगों के हाइपोक्सिया की ओर जाता है।

ऑन्कोलॉजिकल, संक्रामक, आमवाती रोगों में रक्त तत्वों का हेमोलिसिस देखा जाता है, इसलिए डायरेक्ट कॉम्ब्स टेस्ट को अतिरिक्त डायग्नोस्टिक टूल के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। पैथोलॉजिकल स्थिति. साथ ही, यह याद रखने योग्य है: विश्लेषण का नकारात्मक मूल्य हेमोलिसिस की संभावना को बाहर नहीं करता है, लेकिन अतिरिक्त परीक्षा का कारण है।

अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण

पैथोलॉजिकल स्थितियों को रोकने के लिए एक अप्रत्यक्ष परीक्षण का अधिक बार उपयोग किया जाता है।यह रक्त प्लाज्मा में एंटीबॉडी का पता लगाने में मदद करता है, जो गर्भावस्था के दौरान आधान अनुकूलता का आकलन करने और आरएच संघर्ष के जोखिमों का निदान करने के लिए आवश्यक है।

80% से अधिक लोगों के पास सकारात्मक आरएच कारक (आरएच +) है, क्रमशः 20% से कम आरएच-नकारात्मक हैं। यदि एक Rh-माँ एक Rh+ बच्चे को विकसित करती है, तो उसका शरीर एंटीबॉडी का उत्पादन करना शुरू कर देता है जो भ्रूण की लाल रक्त कोशिकाओं पर हमला करता है, जिससे हेमोलिसिस होता है।

इस तथ्य को ध्यान में रखते हुए कि "अलग-अलग-रीसस" विवाहों का प्रतिशत 12-15% तक पहुंच जाता है, नवजात शिशु के हेमोलिटिक रोग का जोखिम अधिक होना चाहिए, लेकिन वास्तव में, महिलाओं में ऐसे 25 में से केवल 1 मामले में, घटना संवेदीकरण मनाया जाता है (200 सफल जन्मों के लिए, हेमोलिटिक पैथोलॉजी का 1 उदाहरण)। यह आंशिक रूप से इस तथ्य के कारण है कि पहला आरएच-पॉजिटिव बच्चा आमतौर पर मां के शरीर की खुली आक्रामकता का कारण नहीं बनता है; अधिकांश मामले दूसरे और बाद के बच्चों में होते हैं। एक विशेष एलर्जेन के लिए पारंपरिक संवेदीकरण के साथ भी यही सिद्धांत लागू होता है।

पहले संपर्क पर कोई प्रतिक्रिया नहीं होती है। शरीर केवल इसके लिए एक नए एंटीजन से परिचित होता है, आईजीएम वर्ग के एंटीबॉडी का उत्पादन करता है, जो तेजी से प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के लिए जिम्मेदार होते हैं, लेकिन शायद ही कभी बच्चे के रक्त में प्लेसेंटल बाधा में प्रवेश करते हैं। सभी पैथोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं बार-बार "मिलने" पर प्रकट होती हैं, जब शरीर में आईजीजी वर्ग के एंटीबॉडी का उत्पादन शुरू होता है, आसानी से भ्रूण के रक्तप्रवाह में घुसना, हेमोलिसिस की प्रक्रिया शुरू करना।

गर्भावस्था के दौरान अप्रत्यक्ष Coumbs परीक्षणआपको मां के शरीर में एंटीबॉडी की उपस्थिति का पता लगाने और समय पर पहचान करने की अनुमति देता है आरंभिक चरणसंवेदीकरण। एक सकारात्मक उत्तर के लिए प्रसव से 3-4 सप्ताह पहले एंटीबॉडी टिटर के मासिक अध्ययन और अनिवार्य अस्पताल में भर्ती होने की आवश्यकता होती है।

संदर्भ! आरएच कारक असंगति किसी भी तरह से मां की स्थिति को प्रभावित नहीं करती है, हेमोलिटिक रोग केवल एक बच्चे में विकसित होता है। गंभीर मामलों में और समय पर प्रतिक्रिया के अभाव में, गर्भ में या जन्म के तुरंत बाद भ्रूण की मृत्यु हो सकती है।

प्रक्रिया और इसके कार्यान्वयन की तैयारी

निदान के लिए उपयोग किया जाता है नसयुक्त रक्त. कॉम्ब्स परीक्षण के लिए विशेष दीर्घकालिक तैयारी की आवश्यकता नहीं होती है। विश्लेषण के लिए नस से रक्त लेने से पहले नियमों के एक मानक सेट का पालन करने का प्रयास करें:

• 3 दिन के लिए शराब छोड़ दें, दवाएं(अगर संभव हो तो);
• विश्लेषण के लिए रक्त लेने से पहले 8 घंटे से पहले अंतिम भोजन की योजना बनाएं;
• 1 घंटे में धूम्रपान, शारीरिक, मानसिक और भावनात्मक तनाव छोड़ दें;
• प्रक्रिया से पहले, एक गिलास साफ गैर-कार्बोनेटेड पानी पिएं।

शोध पद्धति रक्तगुल्म प्रतिक्रिया पर आधारित है।

प्रत्यक्ष परीक्षण करते समयरक्त के नमूने को ज्ञात संकेतकों के साथ पहले से तैयार एंटीग्लोबुलिन सीरम के संपर्क में लाया जाता है, मिश्रण को कुछ समय के लिए रखा जाता है और एग्लूटिनेट्स के लिए जाँच की जाती है, जो एरिथ्रोसाइट्स पर एंटीबॉडी मौजूद होने पर बनते हैं। एग्लुटिनेटिंग टिटर का उपयोग करके एग्लूटिनेट्स के स्तर का निदान किया जाता है।

अप्रत्यक्ष परीक्षण Coombs की एक समान तकनीक है, लेकिन क्रियाओं का एक अधिक जटिल क्रम है। एंटीजेनिक एरिथ्रोसाइट्स (आरएच कारक के साथ) को अलग किए गए रक्त सीरम में पेश किया जाता है, और इन जोड़तोड़ के बाद ही एंटीग्लोबुलिन सीरम को एग्लूटिनेट्स के निदान और टिटर के लिए जोड़ा जाता है।

शोध का परिणाम

आम तौर पर, प्रत्यक्ष और दोनों अप्रत्यक्ष परीक्षणकॉम्ब्सएक नकारात्मक परिणाम देना चाहिए:

• एक नकारात्मक प्रत्यक्ष परीक्षण इंगित करता है कि लाल रक्त कोशिकाओं से जुड़े आरएच कारक के विशिष्ट एंटीबॉडी रक्त में अनुपस्थित हैं और हेमोलिसिस का कारण नहीं हो सकते हैं
• एक नकारात्मक अप्रत्यक्ष परीक्षण से पता चलता है कि रक्त प्लाज्मा में आरएच कारक के लिए कोई मुक्त एंटीबॉडी भी नहीं हैं; तथ्य आरएच कारक के अनुसार प्राप्तकर्ता के रक्त (या मां और बच्चे के रक्त) के साथ दाता के रक्त की अनुकूलता को इंगित करता है।

एक सकारात्मक कॉम्ब्स परीक्षण शरीर के आरएच संवेदीकरण के तथ्य को इंगित करता है, जो रक्त आधान की स्थिति में या एक अलग आरएच स्थिति वाले बच्चे को ले जाने पर आरएच संघर्ष का मुख्य कारण है। इस मामले में, परिणाम 3 महीने (एरिथ्रोसाइट जीवन काल) के लिए अपरिवर्तित रहते हैं। यदि कारण ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया है, तो एक सकारात्मक परीक्षण रोगी को कई वर्षों तक (कुछ मामलों में, जीवन के लिए) परेशान कर सकता है।

संदर्भ! एंटीग्लोबुलिन परीक्षण अत्यधिक संवेदनशील होता है, लेकिन इसमें सूचना सामग्री बहुत कम होती है। यह हेमोलिटिक प्रक्रिया की गतिविधि को पंजीकृत नहीं करता है, एंटीबॉडी के प्रकार को निर्धारित नहीं करता है और पैथोलॉजी के कारण की पहचान करने में सक्षम नहीं है। अधिक संपूर्ण चित्र प्राप्त करने के लिए, उपस्थित चिकित्सक आवश्यक रूप से अतिरिक्त अध्ययन (रक्त माइक्रोस्कोपी, सामान्य और जैव रासायनिक विश्लेषण, आमवाती परीक्षण, ईएसआर, लोहा और फेरिटिन स्तर) निर्धारित करता है।

संवेदीकरण की डिग्री में एक गुणात्मक अभिव्यक्ति हो सकती है ("+" से "++++") या मात्रात्मक - एक कैप्शन के रूप में:

• 1:2 - कम मूल्य, कोई खतरा नहीं है;
• 1:4 - 1:8 - प्रतिरक्षात्मक प्रतिक्रिया के विकास की शुरुआत; कोई खतरा नहीं है, लेकिन निरंतर निगरानी की आवश्यकता है;
• 1:16 -1:1024 - संवेदनशीलता का एक उज्ज्वल रूप, तुरंत उपाय किए जाने चाहिए।

कारण सकारात्मक नमूनामैं हो सकता है:

• दाता और प्राप्तकर्ता के आरएच कारक से मेल नहीं खाने पर, बिना टाइप किए रक्त का आधान (या टाइपिंग त्रुटि के साथ);
• गर्भावस्था के दौरान रीसस संघर्ष (यदि पिता और माता में रक्त प्रतिजनों की संरचना मेल नहीं खाती);
• ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया - दोनों जन्मजात (प्राथमिक) और माध्यमिक, जो कुछ बीमारियों (इवांस सिंड्रोम, संक्रामक निमोनिया, सिफलिस, ठंड हीमोग्लोबिनुरिया, लिम्फोमा) का परिणाम है;
• दवा हेमोलिटिक प्रतिक्रिया।

उपरोक्त में से कोई भी समस्या रोगी के बिना हल नहीं हो सकती है चिकित्सा देखभाल. सभी मामलों में, तत्काल परामर्श, पंजीकरण या आपातकालीन अस्पताल में भर्ती की आवश्यकता होगी।

ध्यान! दुर्लभ मामलों में, झूठी सकारात्मक कॉम्ब्स परीक्षण संभव है। इसका कारण बार-बार रक्त संक्रमण हो सकता है, साथ ही कई बीमारियां भी हो सकती हैं: रुमेटीइड गठिया, ल्यूपस एरिथेमेटोसस, सारकॉइडोसिस। इसके अलावा, इस घटना को तिल्ली को हटाने के साथ-साथ प्रतिक्रिया के दौरान उल्लंघन (सामग्री के लगातार हिलने, दूषित पदार्थों की उपस्थिति) के उल्लंघन के बाद देखा जा सकता है।